人肠上皮细胞（Henle-407）

人肠上皮细胞(Henle-407)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1. 准备【bèi】 DMEM 培养基(DMEM，GIBCO)90%;胎牛血清，10%。
2.培【péi】养条件：气相【xiàng】：空【kōng】气，95%;二【èr】氧化碳【tàn】，5%。温【wēn】度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3. 冻存【cún】液【yè】：90%*培养基，10%DMSO,现用【yòng】现配【pèi】。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细【xì】胞悬液的冻存管在37°C水【shuǐ】浴【yù】中迅速摇晃解冻，加入4mL培【péi】养【yǎng】基【jī】混合均【jun1】匀。在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液【yè】，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将【jiāng】所有细胞悬【xuán】液加入培养瓶【píng】中【zhōng】培养过夜（或将细【xì】胞悬液加入l〇cm皿中，加入【rù】约【yuē】8ml培养基，培【péi】养过夜）。第二天换液并【bìng】检【jiǎn】 查细胞【bāo】密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肠上皮细胞(Henle-407)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上清，用不含钙、镁离【lí】子的PBS润洗细胞9-22次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置【zhì】于37°C培养箱中【zhōng】消化9-22分【fèn】钟，然后在显微【wēi】镜下观察细胞【bāo】消化【huà】情况，若细胞大部 分变圆【yuán】并脱落，迅速拿【ná】回操作台，轻【qīng】敲几【jǐ】下培养瓶后加少量培养【yǎng】基终【zhōng】止 消化。按6-8ml/瓶【píng】补加【jiā】培养基【jī】，轻轻打匀后吸出在1000RPM条【tiáo】件下离心【xīn】4分【fèn】钟【zhōng】，弃去上清液，补【bǔ】加【jiā】l-2mL培养液【yè】后吹【chuī】匀。将细胞悬液【yè】按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养【yǎng】基的新皿中【zhōng】或者 瓶中。
 
细胞冻存：待细【xì】胞生长状态良【liáng】好【hǎo】时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃【qì】去培养基【jī】后加入少量胰酶，细胞【bāo】变【biàn】圆【yuán】脱落后，加入约lml含血清的【de】培【péi】养基后 加入【rù】冻存管中，再【zài】添加【jiā】1〇 %DMSO后进行冻【dòng】存。
 
注意事项：
收到细【xì】胞后，若发现干冰己挥发【fā】干净、冻【dòng】存【cún】管【guǎn】瓶盖【gài】脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们【men】电联【lián】。
所有动物细胞【bāo】均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全【quán】台内【nèi】操作，并请注意防【fáng】护【hù】，所有【yǒu】废液及【jí】接触过此【cǐ】细胞的器皿需【xū】要灭菌【jun1】后方能丢【diū】弃。
 
细胞特性：
1)来源：肠道
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肠上皮细胞(Henle-407)运输和保【bǎo】存：使用含【hán】有胎牛【niú】血清的2ml冻存管发送存【cún】活细胞。收到细【xì】胞后，可在【zài】1000RPM，常温条【tiáo】件下，离心5min后，于洁净操【cāo】作台弃【qì】去上清，加【jiā】入推荐 使用的培养【yǎng】基后转移至l〇cm培养【yǎng】皿或者T25培养瓶中【zhōng】培养，传代达【dá】到【dào】细胞生长【zhǎng】状态良好【hǎo】时【shí】，再进行冻存。具体操作见【jiàn】细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。