人肝癌细胞（Hep-3B）

人肝癌细胞(Hep-3B)
细胞介绍：
Hep-3B细【xì】胞建系【xì】于1979年，源自一位患【huàn】有【yǒu】肝癌的7岁黑【hēi】人男【nán】童。该【gāi】细胞产生甲胎蛋白（alpha-fetoprotein)、乙肝表面抗原（BHsAg)、白蛋白、巨球【qiú】蛋白、a -抗胰蛋白（alphal-antitrypsin)、转铁蛋白、补体（C3)、C3活【huó】性载体，纤维原等，具有广【guǎng】泛【fàn】的研【yán】究价值。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 DMEM 培【péi】养【yǎng】基(DMEM，GIBC0)，90%;胎牛血清，10%。
2.培【péi】养条件：气相：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度：37摄氏度，培【péi】养箱【xiāng】湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基【jī】，10%DMSO,现【xiàn】用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏【sū】细胞【bāo】：将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水【shuǐ】浴中【zhōng】迅速摇晃解冻【dòng】，加入4mL培养基混合【hé】均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培【péi】养基【jī】后吹【chuī】匀。然后将所有细胞【bāo】悬液【yè】加入培养瓶【píng】中培养过夜（或将细胞悬【xuán】液加入l〇cm皿【mǐn】中，加入约8ml培养基【jī】，培养过夜【yè】）。第二天换液并检查细胞密度【dù】。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肝癌细胞(Hep-3B)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗【xǐ】细胞9-22次。力口2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置【zhì】于【yú】37°C培养箱【xiāng】中消化9-22分【fèn】钟，然后在显【xiǎn】微【wēi】镜下【xià】观察【chá】细胞【bāo】消化【huà】情况，若细胞大【dà】部分【fèn】变圆并脱落，迅速拿回【huí】操作台，轻敲几下培养瓶后加少量【liàng】培养【yǎng】基终【zhōng】止消化。按6-8ml/瓶补加【jiā】培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件【jiàn】下【xià】离心4分钟，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培养液【yè】后吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新【xīn】皿【mǐn】中或者瓶中。
 
3)细胞冻存：待细胞生长【zhǎng】状态良【liáng】好时，可【kě】进【jìn】行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少【shǎo】量【liàng】胰【yí】酶，细胞【bāo】变圆脱落后，加入约【yuē】lml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进【jìn】行冻存。
 
注意事项：
收到【dào】细胞后，若发现【xiàn】干冰己挥发干【gàn】净、冻存管瓶盖脱落、破【pò】损【sǔn】及细胞有【yǒu】污染，请立【lì】即与我们电【diàn】联。
所有动【dòng】物细胞均视为有潜在的生物危【wēi】害【hài】性，必须在二【èr】级生物安全【quán】台内操作，并请注意防护，所有废液【yè】及接触过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌【jun1】后【hòu】方【fāng】能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：肝癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肝癌细胞(Hep-3B)运输和保【bǎo】存：使用含有胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下【xià】，离心5min后，于洁净【jìng】操作台【tái】弃去上清，加入推荐使用的【de】培养基后转【zhuǎn】移至【zhì】l〇cm培【péi】养皿【mǐn】或者T25培【péi】养瓶中【zhōng】培【péi】养，传代达到细胞生长【zhǎng】状态【tài】良好时，再进行冻存【cún】。具【jù】体操作见细【xì】胞培养步骤【zhòu】。
细胞用途：仅供使用。