人胚肺成纤维细胞（HFL-1）

人胚肺成纤维细胞(HFL-1)
细胞介绍：
该细胞为稳定二倍体细胞。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备F-12K培养基（F-12K: GIBCO)，80%;胎牛血清， 20%。
2.培养【yǎng】条件【jiàn】：气【qì】相：空【kōng】气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用【yòng】现配。液【yè】氮【dàn】储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含有lmL细【xì】胞悬液【yè】的冻存管在【zài】37°C水浴中迅速摇晃【huǎng】解冻，加入【rù】4mL培养基混【hún】合均匀【yún】。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养基后吹【chuī】匀。然【rán】后将所有细胞悬液加入培【péi】养【yǎng】瓶【píng】中培养过夜（或将细胞悬液加入【rù】l〇cm皿中，加【jiā】入【rù】约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养
 
人胚肺成纤维细胞(HFL-1)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上【shàng】清，用不含钙、镁离子【zǐ】的PBS润洗细【xì】胞【bāo】9-22次。力口2m丨消化【huà】液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶中，置于37°C培【péi】养箱中消化9-22分钟，然后在显微镜下观察细【xì】胞【bāo】消化【huà】情况【kuàng】，若【ruò】细胞大部 分变圆并【bìng】脱落，迅速拿回操作台，轻【qīng】敲几下培养瓶后加少量培【péi】养基终止消【xiāo】化。按6-8ml/瓶【píng】补加培养基，轻轻【qīng】打匀后吸出，在1000RPM条件【jiàn】下【xià】离心4分钟，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培【péi】养【yǎng】液后吹匀【yún】。将【jiāng】细【xì】胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新【xīn】的【de】含8ml培养基【jī】的新皿中。

细【xì】胞冻存：待细胞生长状态【tài】良【liáng】好【hǎo】时，可进【jìn】行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后【hòu】加入少量胰【yí】酶，细胞变圆脱【tuō】落后，加入约lml含血清的培养【yǎng】基【jī】后加【jiā】入冻存管中【zhōng】，再添加1〇%DMSO后进行冻存【cún】。

 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰【bīng】己【jǐ】挥【huī】发干净、冻存管瓶盖脱落、破【pò】损及【jí】细胞有污染，请立【lì】即【jí】与我们电联。
所有动物细胞【bāo】均视为有潜在的【de】生物危害性，必须在【zài】二级生物【wù】安全【quán】台内操作，并请注意【yì】防护，所有废【fèi】液及接触【chù】过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃瓶中。

 
细胞特性：
1)来源：肺
2)形态：成纤维细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人胚肺成纤维细胞(HFL-1)运输和保存：使用含有胎牛【niú】血清的2ml冻存管发送【sòng】存活细胞【bāo】。收到【dào】细胞后【hòu】，可在1000RPM，常温【wēn】条件【jiàn】下，离心5min后，于洁净【jìng】操作台弃去【qù】上清，加入推【tuī】荐使用的培养基后【hòu】转移至l〇cm培养皿或者T25培养【yǎng】瓶【píng】中培【péi】养【yǎng】，传代达到细胞生长状态【tài】良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。