人肾皮质近曲小管上皮细胞（HK-2）

人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)
细胞介绍：
该细胞【bāo】属源于正常肾的近曲【qǔ】小【xiǎo】管细胞【bāo】，通过导入HPV-16 E6/E7基【jī】因而获得永生化。将含有HPV-16 E6/E7基因的重【chóng】组的【de】逆转【zhuǎn】录载【zǎi】体pLXSN 16 E6/E7转染外生 包【bāo】装细【xì】胞Psi-2，Psi-2细胞产生的【de】再去【qù】感染【rǎn】兼嗜性包装细胞系【xì】PA317，后 将PA317产生的【de】颗粒导入正常的【de】肾皮质【zhì】近曲小管细胞【bāo】。尽管【guǎn】pLXSN 16 E6/E7中【zhōng】含有新霉素抗性，但未用【yòng】G418筛【shāi】选转导【dǎo】克隆。Southern和FISH分析显示HK-2 细胞来【lái】源于单克隆。PCR检测证实HK-2细【xì】胞基【jī】因组中含有E6/E7基因。

 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1. 准备角化培【péi】养【yǎng】基（Defined K-SFM);角化因子（500X);添 力【lì】口 5ng/mLEGF;双抗1%。
2. 培养条件【jiàn】：气相：空【kōng】气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度，培养【yǎng】箱湿【shī】度【dù】为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
1.复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在【zài】37°C水浴中迅【xùn】速摇晃解冻【dòng】，加 入【rù】4mL培【péi】养【yǎng】基混【hún】合均匀。在1000RPM条件下离【lí】心【xīn】4分钟【zhōng】，弃去【qù】上清液，补加l-2mL培【péi】养基后吹匀。然后将所有细胞悬【xuán】液加入【rù】培养瓶【píng】中培养过夜（或将细胞悬液【yè】加入l〇cm皿中，加入【rù】约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2.细胞传代：如果细胞密度【dù】达80%-90%，即可进行【háng】传代【dài】培养【yǎng】。
 
人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上【shàng】清，用不【bú】含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-22次。力【lì】口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中【zhōng】，置于37°C培养箱中消化【huà】9-22分钟，然后【hòu】在【zài】显微镜下观察细胞消化情况【kuàng】，若细胞【bāo】大部 分变圆并【bìng】脱落，迅速拿回操作【zuò】台，轻敲几下【xià】培【péi】养瓶后加少量培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培养【yǎng】基，轻轻打【dǎ】匀后吸出，在1000RPM条件【jiàn】下离【lí】心4分钟【zhōng】，弃去【qù】上清液【yè】，补加l-2mL培养液后吹【chuī】匀【yún】。将细胞【bāo】悬液按【àn】1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞【bāo】冻存时，弃【qì】去【qù】培养基后，PBS清洗瓶底9-22次后加入lml胰酶【méi】，细胞变圆脱【tuō】落后，加入2ml*培【péi】养基【jī】终止消化，可使用血球计数板计数。

1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重【chóng】悬浮，加【jiā】DMSO至终浓【nóng】度为【wéi】10%。加入【rù】DMSO后迅速混匀，按每lml的数量分【fèn】配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本【běn】公司按每【měi】个冻存管细胞数目大于【yú】1X106个细【xì】胞冻【dòng】存。将冻存【cún】管置【zhì】于程序降温盒中，放入-80度【dù】冰箱，至少2个【gè】小时以后转入【rù】液氮灌储【chǔ】存。记录冻存管位置以便下次拿取【qǔ】。

 
注意事项：
收到细胞【bāo】后【hòu】，若发现干冰己挥发【fā】干净、冻存【cún】管【guǎn】瓶盖脱【tuō】落、破损及细胞有污染，请立即与我们电联【lián】。
所有动物【wù】细胞均【jun1】视为有【yǒu】潜在的生【shēng】物危害性，必须在二级生物安【ān】全【quán】台内操作【zuò】，并请注意【yì】防护，所有废液【yè】及接触【chù】过此细胞的器皿要消毒灭菌后方能丢弃瓶中。

 
细胞特性：
1)来源：正常肾
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)运输和保存：可选【xuǎn】择干冰运输及发【fā】送【sòng】复苏【sū】存活细胞【bāo】方式：（1)干冰运输，收到后立【lì】即转【zhuǎn】入【rù】液氮冻存或直接复苏；（2)存活【huó】细胞

，收到【dào】后应继续生【shēng】长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存【cún】。具体【tǐ】操作见细胞培【péi】养【yǎng】步骤。
细胞用途：仅供使用。