人原髓细胞白血病细胞 （HL-60）

人原髓细胞白血病细胞 (HL-60)
细胞介绍：
HL-60是一株早幼粒细【xì】胞【bāo】。外【wài】周血白细胞来自一位患有急【jí】性粒-单核【hé】细胞白血病【bìng】的36岁白人女性。HL-60自发【fā】分【fèn】化，丁酸盐、佛波【bō】醇肉豆蔻酸(PMA,TPA)、 DMS0(1% to 1.5%)、放线菌素D和【hé】视黄酸可以促进分化【huà】。细胞【bāo】表【biǎo】现出吞【tūn】噬活性【xìng】，并对趋化【huà】刺激有响应。致癌基因myc表达阳性。

 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备丨1/101/1培养基(丨1/101/1/)，80%;胎【tāi】牛血清，20%。
2.培养【yǎng】条【tiáo】件：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳，5%。温度【dù】：37摄氏度，培养箱 湿度为70%-80%。
3.冻存液【yè】：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现【xiàn】用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含【hán】有【yǒu】lmL细【xì】胞悬【xuán】液的冻【dòng】存管在37°C水浴中迅速【sù】摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养【yǎng】基后吹匀。然后将所有细胞悬【xuán】液加入培养【yǎng】瓶中【zhōng】培【péi】养【yǎng】过夜（或将细胞悬液加入l〇cm皿中，加【jiā】入约【yuē】8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人原髓细胞白血病细胞 (HL-60)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁【měi】离子的PBS润洗细胞9-22次。力【lì】口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶【píng】中，置【zhì】于【yú】37°C培养箱中消化【huà】9-22分钟【zhōng】，然【rán】后在显微镜下观察细胞消化情【qíng】况，若细【xì】胞【bāo】大部分【fèn】变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下【xià】培养瓶后加少量培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培【péi】养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下【xià】离心4分【fèn】钟，弃【qì】去上【shàng】清液，补【bǔ】加【jiā】l-2mL培养液后吹匀。将细【xì】胞悬【xuán】液【yè】按1: 2到【dào】1: 5的比例分【fèn】到新的含8ml培【péi】养基的新皿中或者【zhě】瓶中。

 
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收【shōu】集细胞，1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去上【shàng】清液，补【bǔ】加l-2mL培养液后吹匀，将细【xì】胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新【xīn】的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方【fāng】法二：可选择半数换液【yè】方式【shì】，弃去半数【shù】培养基后，将剩【shèng】余细胞悬起，将细胞悬【xuán】液【yè】按【àn】1: 2到1: 3的比例分到【dào】新的含8ml培养基【jī】的新皿中或者瓶中。

 
细【xì】胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进【jìn】行细胞冻存。贴壁细胞【bāo】冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞【bāo】变【biàn】圆【yuán】脱落后，加入约lml含血清的培养【yǎng】基后 加入【rù】冻存管【guǎn】中，再【zài】添加1〇%DMSO后进行冻存。悬浮【fú】细胞【bāo】冻【dòng】存时【shí】，应将细胞收【shōu】集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存【cún】上清液（防止细胞吸走)，加【jiā】入部分新【xīn】鲜培养基【jī】，加入到【dào】冻【dòng】存【cún】管中，在【zài】冻存管中加入1〇%DMSO后进行冻存。

 
注意事项：
收到【dào】细胞后，若【ruò】发现干【gàn】冰己挥发【fā】干净、冻【dòng】存管瓶盖脱【tuō】落、破损及细胞有污染，请【qǐng】立即与我们【men】电联。
所有动物细胞均视为有潜在的生物【wù】危害性【xìng】，必须在二级生物安全台【tái】内【nèi】操【cāo】作，并请注意【yì】防护，所有废【fèi】液及接触【chù】过此【cǐ】细胞的器【qì】皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：外周血；早幼粒细胞；急性粒一单核细胞白血病
2)形态：原粒细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人原髓细胞白血病细胞 (HL-60)运输和保存：可【kě】选择干冰运输及发送复【fù】苏存活细胞方式：（1)干冰运输，收【shōu】到后立【lì】即【jí】转【zhuǎn】入液氮冻存或【huò】直接复苏；（2)存【cún】活细胞【bāo】

，收【shōu】到【dào】后应继续【xù】生长【zhǎng】，传代达到细【xì】胞生长状【zhuàng】态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养【yǎng】步骤。
细胞用途：仅供使用。