人微血管内皮细胞株（HMEC-1）

人微血管内皮细胞株(HMEC-1)
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.内皮培【péi】养【yǎng】基（日0/1:5(^加6丨【shù】丨1001);添加10叩加1^6卩;10mM谷氨【ān】酰胺【àn】；胎牛血清，10%。
2.培【péi】养条件：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37°C，培养箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞【bāo】：将含有lmL细【xì】胞悬液的冻存管迅速【sù】放入37°C水浴【yù】中（水面要低于冻【dòng】存管盖【gài】部【bù】）摇晃解冻，移入【rù】事先准备【bèi】好的含【hán】有4mL培养基的15ml离心【xīn】管中混【hún】合均【jun1】匀。在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去【qù】上清液，加【jiā】入lmL培【péi】 养基后吹匀。然后将所有细胞【bāo】悬液【yè】移入含有5ml培养基的【de】培养瓶【píng】中【zhōng】培【péi】养【yǎng】过【guò】夜。 第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人微血管内皮细胞株(HMEC-1)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养【yǎng】上清，用【yòng】不含钙、镁离【lí】子的PBS润洗细胞9-22次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中【zhōng】，置于37°C培养箱中消化【huà】9-22分【fèn】钟，然后在显微镜下【xià】观察细胞消化情【qíng】况，若细胞大部分变圆并【bìng】脱落，迅【xùn】速【sù】拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加【jiā】入3ml此细胞的【de】培【péi】养基终止消【xiāo】化。轻轻【qīng】吹【chuī】打后吸【xī】出，移入15ml离心管【guǎn】中，在【zài】1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，加入lmL培养液后吹【chuī】匀。移入到事先准备好的【de】含有5ml培【péi】养基的T-25培【péi】养瓶中【zhōng】或含有14ml培【péi】养基的T-75培养【yǎng】瓶中培养。

 
细【xì】胞冻存：待【dài】细胞生长状态【tài】良好时，可进行细胞【bāo】冻存。贴壁细胞【bāo】冻【dòng】存时，先要消化处理并进【jìn】行细【xì】胞计数【shù】。消化方法按照细胞传代方法【fǎ】的9-22步骤进行，后的重【chóng】悬液使用血清。悬【xuán】浮细胞直接计数后【hòu】离心【xīn】，用血清重悬浮【fú】，加DMSO至终浓【nóng】度为10%。加入DMSO后迅【xùn】速【sù】混匀，按每lml的数量分配【pèi】到【dào】冻【dòng】存管【guǎn】中。本公司按【àn】每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

 
注意事项：
收【shōu】到细胞后，若发现干冰己挥【huī】发干净、冻存【cún】管瓶盖脱落【luò】、破损及细胞【bāo】有污染，请立即【jí】与【yǔ】我【wǒ】们电联。
所有动物【wù】细胞【bāo】均【jun1】视为有潜【qián】在的生物危害性，必须在【zài】二级生物安全台内【nèi】操【cāo】作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器【qì】皿需

要灭菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：血管
2)形态：内皮细胞，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人微血管内皮细胞株(HMEC-1)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显【xiǎn】微镜【jìng】下确认【rèn】细胞生长状态，去【qù】掉封【fēng】口膜并将T25瓶置于37°C培【péi】养约2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如【rú】果细胞长满（90%以上）请及时进行细【xì】胞【bāo】传【chuán】代，传代【dài】培养用6ml本【běn】公【gōng】司附带的*培养基。
5.接【jiē】到【dào】细胞次日【rì】，请检查细胞【bāo】是否【fǒu】污染，若发现污染【rǎn】或疑似污染，请【qǐng】及时与我们取【qǔ】得电联。
细胞用途：仅供使用。