人胰腺癌细胞 （HPAC）

人胰腺癌细胞 (HPAC)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备DMEM培养基(DMEM培养【yǎng】基(GIBCO,添【tiān】加NaHC031.5g)，90%;胎牛【niú】血清【qīng】，10%。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化碳【tàn】，5%。温度【dù】：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培【péi】养【yǎng】基，10%DMSO,现【xiàn】用现配。液氮【dàn】储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻【dòng】存管【guǎn】在37°C水浴中迅速【sù】摇晃【huǎng】解冻，加入4mL培养【yǎng】基混合【hé】均匀。在【zài】1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃去上清【qīng】液，补加l-2mL培养基后吹匀【yún】。然后将【jiāng】所有细胞悬液加入培养瓶【píng】中培养过夜（或将细胞悬液加【jiā】入l〇cm皿中，加入【rù】约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人胰腺癌细胞 (HPAC)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上【shàng】清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-22次【cì】。力口2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培养箱中【zhōng】消化9-22分【fèn】钟，然后【hòu】在【zài】显微【wēi】镜下【xià】观察细胞消化情况，若细胞大部 分【fèn】变圆并脱落，迅速拿回【huí】操作台，轻敲几【jǐ】下培【péi】养瓶后加少【shǎo】量培【péi】养基【jī】终止【zhǐ】消化【huà】。按6-8ml/瓶补【bǔ】加培养基，轻【qīng】轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清【qīng】液，补加l-2mL培养液后吹匀。 将细胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的比例【lì】分【fèn】到新的含8ml培【péi】养基的新皿中或者瓶中。

 
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去上清【qīng】液，补加【jiā】l-2mL 培养【yǎng】液【yè】后吹匀，将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例【lì】分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半数【shù】换液方式，弃去【qù】半数培【péi】养基【jī】后，将剩余细胞【bāo】悬【xuán】起，将细胞悬液按1: 2到1: 3的比例分到新的含【hán】8ml培【péi】养【yǎng】基【jī】的新皿中或者瓶中。

 
细胞冻存：待细胞生【shēng】长【zhǎng】状态【tài】良好时，可进行细【xì】胞冻存【cún】。贴壁【bì】细胞冻存时，弃去【qù】培养基【jī】后加入少量胰酶，细胞变【biàn】圆脱落【luò】后，加入约lml含血清【qīng】的培养基后加入冻存【cún】管中，再添【tiān】加1〇%DMSO后【hòu】进行冻存。悬【xuán】浮细胞冻存时，应【yīng】将细胞收集，1000RPM条件下【xià】离心4分钟，少量保存【cún】上清液（防【fáng】止【zhǐ】细胞吸走)，加入部分新【xīn】鲜培养基，加入到【dào】冻存管中【zhōng】，在【zài】冻存管中加【jiā】入1〇%DMSO后进【jìn】行【háng】冻存。

 
注意事项：
收到【dào】细【xì】胞后，若发【fā】现干冰己挥发【fā】干净、冻存管瓶【píng】盖【gài】脱落、破损及【jí】细胞【bāo】有污染，请立即与我们电联。
所有动物【wù】细胞均视为【wéi】有潜在的生【shēng】物【wù】危害性，必【bì】须在二级生物安全【quán】台内【nèi】操作【zuò】，并请注意防护，所有废液及接触【chù】过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
人胰腺癌细胞 (HPAC)细胞特性：
1)来源：人胰腺癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运输和保存：可选择干【gàn】冰运输及【jí】发送复苏存活细胞方式【shì】：（1)干冰运【yùn】输，收到后立即转入液氮冻存或【huò】直接【jiē】复苏【sū】；（2)存活细【xì】胞，收到后应继续【xù】生【shēng】长，传【chuán】代达到细胞生长状态良【liáng】好时，再进行冻【dòng】存。具体操【cāo】作见【jiàn】细胞培【péi】养步骤。

细胞用途：仅供使用。