人皮肤成纤维细胞（HSF）

人皮肤成纤维细胞(HSF)
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 DMEM 培养基(DMEM，GIBCO)，85%;北美胎牛血清(United StatesGIBCO15%）。

2.培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37°C，培养箱湿【shī】度【dù】 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞：将含【hán】有lmL细【xì】胞悬【xuán】液的冻存管迅速放入【rù】37°C水浴【yù】中【zhōng】（水【shuǐ】面【miàn】要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培【péi】养【yǎng】基【jī】的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条【tiáo】件下【xià】离心4分钟，弃去上清液，加入lmL培【péi】养【yǎng】基后吹匀。然【rán】后将所有细胞悬液移入含【hán】有5ml培养【yǎng】基的培养瓶中培养过夜【yè】。第二【èr】天换液【yè】并检查细胞【bāo】密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人皮肤成纤维细胞(HSF)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上【shàng】清，用不含钙【gài】、镁【měi】离【lí】子的PBS润洗细胞9-22次。加2m丨消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶中，置于37°C培养箱中消化【huà】9-22分钟，然后在显微镜下【xià】观【guān】察细胞消【xiāo】化情【qíng】况【kuàng】，若细【xì】胞大部分变圆并脱【tuō】落，迅速拿回操作台，轻敲几【jǐ】下培养瓶后加入3ml此细胞的培【péi】养基终止消化。轻【qīng】轻吹【chuī】打后吸【xī】出，移入15ml离心管【guǎn】中，在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，加入lmL培【péi】养【yǎng】液【yè】后吹【chuī】匀。移【yí】入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培【péi】养瓶中【zhōng】或含有【yǒu】14ml培养基的 T-75培养瓶中培【péi】养。

 
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存【cún】。贴壁细胞冻存时，先要【yào】消化处【chù】理【lǐ】并进行细【xì】胞计数【shù】。消化方【fāng】法按照细【xì】胞传代【dài】方法的9-22步骤进【jìn】行，后的重悬液使【shǐ】用血清。加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅速混【hún】匀【yún】，按每【měi】lml的数【shù】量分配到【dào】冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

 
注意事项：
收到细胞后，若发现干【gàn】冰己挥发干净【jìng】、冻存管瓶盖脱落【luò】、破损及【jí】细胞有污染，请立即与我们电联【lián】。
所有动物【wù】细胞【bāo】均视为有【yǒu】潜在的生物【wù】危害性，必须在二级生物【wù】安全【quán】台内操作，并请注意防护，所【suǒ】有【yǒu】废【fèi】液及接【jiē】触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：人
2)形态：贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人皮肤成纤维细胞(HSF)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先【xiān】在显微镜下确认细胞生【shēng】长状态，去掉封口膜并将T25瓶【píng】置【zhì】于37°C培养【yǎng】约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞长满（90%以【yǐ】上）请及时进【jìn】行【háng】细胞【bāo】传代，传【chuán】代培养用6ml本【běn】公【gōng】司附带的*培养基。
5.接到细胞次日，请检查细胞【bāo】是否【fǒu】污【wū】染，若【ruò】发现污染或疑似污染，请【qǐng】及时与我们取得电联【lián】。
细胞用途：仅供使用。