人结肠癌细胞（HT-29）

人结肠癌细胞(HT-29)
细胞介绍：
1964年，HT-29细胞系由j.Fogh用移植培【péi】养方法和含15%FBS的F12培【péi】养【yǎng】液从原
发性肿瘤【liú】分【fèn】离。近来，己建株【zhū】的培【péi】养细胞用【yòng】含血清McCoy's 5A培液培养。该细胞系在裸鼠中致【zhì】瘤，也能在类【lèi】固醇【chún】处理的【de】地鼠中【zhōng】致瘤。

 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 McCoy's 5A 培【péi】养基(McCoy's 5A，GIBC0)，90%;胎牛血清【qīng】，10%。
2. 培【péi】养条【tiáo】件：气相：空气【qì】，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻【dòng】存【cún】液：90%*培【péi】养基，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细【xì】胞悬液的【de】冻存管在37°C水【shuǐ】浴中迅速摇【yáo】晃解【jiě】冻【dòng】，加入4mL培【péi】养基混合均【jun1】匀。在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀【yún】。然【rán】后将所有【yǒu】细胞【bāo】悬液加【jiā】入培养瓶【píng】中培养过夜（或将【jiāng】细胞悬液【yè】加入【rù】l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人结肠癌细胞(HT-29)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培【péi】养上清【qīng】，用不含【hán】钙、镁【měi】离【lí】子【zǐ】的PBS润【rùn】洗细胞9-22次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-22分【fèn】钟，然【rán】后在显微【wēi】镜下观察【chá】细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅【xùn】速拿回【huí】操作台，轻敲几下培养【yǎng】瓶后加【jiā】少量【liàng】培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培养基【jī】，轻轻【qīng】打匀后吸出，在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培【péi】养【yǎng】液【yè】后【hòu】吹匀。将细胞悬液按1: 2到【dào】1: 5的比例分到新的含【hán】8ml培养基的新皿【mǐn】中或者瓶中。

 
细胞【bāo】冻存：待细胞生长【zhǎng】状态良好时，可【kě】进行细胞【bāo】冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加【jiā】入少量胰【yí】酶，细【xì】胞变圆脱落后【hòu】，加入约lml含血清的【de】培养【yǎng】基后 加入冻存管中，再【zài】添加1〇%DMSO后进行冻【dòng】存。

 
注意事项：
收到细【xì】胞后，若发现干冰【bīng】己挥【huī】发干净、冻【dòng】存管瓶盖脱落【luò】、破损及细【xì】胞有污染，请立即与我们【men】电联。
所有动物细胞【bāo】均视为【wéi】有【yǒu】潜在的生物危害性，必须在二级生【shēng】物安全台内操作，并请【qǐng】注意防护【hù】，所有【yǒu】废液【yè】及接触过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃瓶中。

 
细胞特性：
1)来源：结肠癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人结肠癌细胞(HT-29)运输【shū】和保存【cún】：使【shǐ】用含有胎【tāi】牛血清的2ml冻存管发送【sòng】存活细【xì】胞。收到细胞后，可在1000RPM，常【cháng】温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加【jiā】入推荐使【shǐ】用【yòng】的培养基后转移至【zhì】l〇cm培养皿或者【zhě】T25培养【yǎng】瓶中【zhōng】培养【yǎng】，传代达到细胞【bāo】生长状态良好【hǎo】时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。