人眼小梁网细胞 （HTMC）

人眼小梁网细胞 (HTMC)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 DMEM-F12 培养基(DMEM-F12:GIBCO)，85%;胎牛血清，15%。PS: 1%。
2. 培养条件【jiàn】：气相：空气【qì】，95%;二【èr】氧化碳【tàn】，5%。温【wēn】度：37摄【shè】氏度，培【péi】养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现【xiàn】配【pèi】。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有lmL细胞悬液的冻【dòng】存管在37°C水浴中【zhōng】迅【xùn】速摇晃解冻，加入4mL培养基【jī】混合均【jun1】匀。在1000RPM条件【jiàn】下【xià】离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后【hòu】吹【chuī】匀。然后将所有细【xì】胞【bāo】悬液【yè】加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬【xuán】液加入【rù】l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人眼小梁网细胞 (HTMC)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上清，用不含【hán】钙、镁【měi】离子的PBS润【rùn】洗细胞9-22次。力口2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置于【yú】37°C培养【yǎng】箱【xiāng】中消【xiāo】化9-22分钟，然后在【zài】显微镜【jìng】下观察细胞消化情况，若细胞大部分变【biàn】圆并脱落，迅速拿回操作【zuò】台【tái】，轻【qīng】敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培养基【jī】，轻轻打匀后【hòu】吸出，在1000RPM条件下离心【xīn】4分 钟，弃去上清【qīng】液，补加【jiā】l-2mL培养液后【hòu】吹匀。 将细【xì】胞悬液按1: 2到1: 5的比【bǐ】例分【fèn】到新的含8ml培养基的【de】新皿【mǐn】中或者瓶中。

 
3)细胞【bāo】冻存：待细胞生长状【zhuàng】态良好时【shí】，可进行【háng】细胞【bāo】冻存。贴壁细胞冻存时【shí】，弃去培养【yǎng】基后加入少量胰酶，细胞变【biàn】圆脱落后，加【jiā】入约lml含血清的【de】培养基【jī】后加入冻【dòng】存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。

 
注意事项：
收到细胞后【hòu】，若【ruò】发现【xiàn】干冰己挥发干净、冻存管【guǎn】瓶盖脱落【luò】、破损及细胞有污染【rǎn】，请立即与【yǔ】我们电【diàn】联。
所【suǒ】有【yǒu】动物细胞【bāo】均【jun1】视为【wéi】有潜在【zài】的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并【bìng】请注意防护，所有废【fèi】液及接触过【guò】此【cǐ】细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：人眼
2)形态：上皮细胞样、贴壁
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人眼小梁网细胞 (HTMC)输和保存：使用含【hán】有胎牛血清的2ml冻存管【guǎn】发送存活细胞。收到细【xì】胞后， 可在1000RPM，常温条【tiáo】件下，离心【xīn】5min后，于洁【jié】净操作台弃去【qù】上清，加入推【tuī】荐【jiàn】使用的培养基后转【zhuǎn】移至l〇cm培养【yǎng】皿或者T25培【péi】养瓶【píng】中培养，传代达到细胞【bāo】生长状态【tài】良好时，再进【jìn】行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。