人肝癌细胞（Huh7.5）

人肝癌细胞(Huh7.5)
细胞介绍：
该细胞【bāo】可被【bèi】细【xì】胞培养体系的HCV所感染。为模拟人【rén】体内【nèi】环境，可选择Huh7.5作为【wéi】NKs的靶细胞，用于检测NK细胞杀伤功能。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO)，90%;胎牛血清，10%。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温【wēn】度：37摄氏【shì】度，培养箱湿【shī】度【dù】为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用【yòng】现配【pèi】。液氮【dàn】储存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将含有lmL细胞悬液的【de】冻【dòng】存【cún】管在【zài】37°C水浴中迅【xùn】速摇【yáo】晃【huǎng】解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃【qì】去上清液，补加【jiā】l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细【xì】胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将【jiāng】细胞悬液【yè】加入l〇cm皿中【zhōng】，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检 查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肝癌细胞(Huh7.5)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上【shàng】清，用不含钙、镁离【lí】子的PBS润洗细胞9-22次。力【lì】口【kǒu】2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置于37°C培养【yǎng】箱中消化9-22分钟，然后在显【xiǎn】微镜下观察细胞消化【huà】情【qíng】况，若细胞【bāo】大部分变圆并【bìng】脱【tuō】落，迅速拿回操作台，轻敲【qiāo】几下培养瓶后加少量培养基【jī】终止消化。按【àn】6-8ml/瓶补【bǔ】加培养基，轻轻【qīng】打匀后吸出，在1000RPM条件【jiàn】下离心4分【fèn】钟，弃去上清液【yè】，补加l-2mL培养【yǎng】液后【hòu】吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到【dào】新【xīn】的【de】含8ml培养【yǎng】基的【de】新皿中或者瓶中。

细胞冻存：待细【xì】胞生长状态良好时，可进【jìn】行细【xì】胞【bāo】冻【dòng】存。贴壁细胞冻存时【shí】，弃【qì】去培养基后加入少量胰【yí】酶，细胞变【biàn】圆脱落后，加入约【yuē】lml含血清【qīng】的培养【yǎng】基后加入【rù】冻存管中，再添【tiān】加1〇%DMSO后进行冻存。

 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰【bīng】己【jǐ】挥发干净、冻存管瓶【píng】盖【gài】脱落、破损及细胞有污【wū】染【rǎn】，请立【lì】即与我们电【diàn】联。
所有动【dòng】物细胞均视为有潜在的生物危害性，必【bì】须在【zài】二级生【shēng】物安【ān】全台内操作，并请【qǐng】注意防护，所【suǒ】有废液及接触过此【cǐ】细胞【bāo】的器皿【mǐn】需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：肝癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肝癌细胞(Huh7.5)运输和保存：使用含有胎牛血清的2ml冻存管发送【sòng】存活细【xì】胞。收到【dào】细胞后【hòu】，可在1000RPM，常温条【tiáo】件【jiàn】下，离心5min后，于洁净操作台弃去上【shàng】清，加入推荐使用的培养基后转移至l〇cm培养皿【mǐn】或者【zhě】T25培【péi】养瓶中培养【yǎng】，传代达到细胞生【shēng】长 状态【tài】良【liáng】好【hǎo】时【shí】，再进【jìn】行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。