人肝癌细胞（HuH-7）

人肝癌细胞(HuH-7)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 DMEM 培养【yǎng】基(DMEM，GIBCO)，添加【jiā】 1% NEAA，胎牛血清，10%。
2. 培养条【tiáo】件【jiàn】：气相【xiàng】：空气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3. 冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现【xiàn】配【pèi】。液氮【dàn】储存【cún】。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬液的【de】冻存管【guǎn】在37°C水浴中【zhōng】迅速摇晃【huǎng】解冻，加入4mL培【péi】养基混合均【jun1】匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清液，补加【jiā】l-2mL培【péi】养【yǎng】基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将【jiāng】细【xì】胞悬液加【jiā】入l〇cm皿中，加【jiā】入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肝癌细胞(HuH-7)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上清，用【yòng】不含钙、镁离【lí】子的PBS润【rùn】洗【xǐ】细【xì】胞9-22次。力口2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中【zhōng】消化9-22分钟，然后在显微镜下【xià】观察细胞消【xiāo】化情况，若细胞大部 分变圆并脱落，迅速【sù】拿【ná】回操作台，轻【qīng】敲几下【xià】培养瓶【píng】后加少量培【péi】养基终止 消化。按6-8ml/瓶补【bǔ】加【jiā】培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分【fèn】钟，弃【qì】去上清【qīng】液，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液【yè】按【àn】1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养【yǎng】基的新【xīn】皿【mǐn】中【zhōng】或【huò】者瓶中。

 
3)细胞冻存：待细胞生长状态良好【hǎo】时【shí】，可进行细【xì】胞冻【dòng】存。贴壁细胞冻存【cún】时，弃去培养基后加入少【shǎo】量胰【yí】酶，细胞【bāo】变圆脱落后，加【jiā】入约lml含【hán】血清的培养【yǎng】基后加入冻存管中【zhōng】，再添加1〇%DMSO后进行【háng】冻存。

 
注意事项：
收到细胞后【hòu】，若发现【xiàn】干冰己挥发干净、冻【dòng】存管瓶盖【gài】脱落【luò】、破损及细胞有污染，请立即【jí】与【yǔ】我们【men】电联。
所有动物细胞均视为有潜【qián】在的生物危【wēi】害性，必须在【zài】二级【jí】生物安全台内操作，并【bìng】请注意防护，所【suǒ】有废液【yè】及接【jiē】触过此细胞【bāo】的器皿需【xū】要灭菌后方能丢弃。

 
人肝癌细胞(HuH-7)细胞特性：
1)来源：肝
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运【yùn】输和【hé】保【bǎo】存：使用含有胎牛血【xuè】清的【de】2ml冻【dòng】存管发送存活细胞。收到细胞后【hòu】，可在【zài】1000RPM，常温【wēn】条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去【qù】上清，加入推荐使用的【de】培养基后转移至l〇cm培养皿【mǐn】或者T25培养【yǎng】瓶【píng】中培【péi】养，传代达到细胞生长【zhǎng】状态良【liáng】好【hǎo】时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。