人十二脂肠腺癌 （HuTu-80）

人十二脂肠腺癌 (HuTu-80)
细胞介绍：
该细胞上蛙皮素受体的位点多达6000个。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle ’s Balanced Salts) ,10%FBS 。
2. 培养条【tiáo】件【jiàn】：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培【péi】养箱湿度【dù】为70%-80%。
3.冻【dòng】存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配。液氮【dàn】储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存【cún】管在37°C水浴中迅速摇晃【huǎng】解冻【dòng】，加入4mL培【péi】养【yǎng】基【jī】混合【hé】均匀。在【zài】1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去上清【qīng】液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后【hòu】将所有【yǒu】细【xì】胞悬液加入【rù】培养瓶中【zhōng】培养过夜（或将细【xì】胞悬液【yè】加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人十二脂肠腺癌 (HuTu-80)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上【shàng】清，用不含【hán】钙、镁离子【zǐ】的PBS润洗细胞【bāo】9-22次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-22分【fèn】钟，然后【hòu】在显微镜【jìng】下观察细【xì】胞消【xiāo】化情【qíng】况【kuàng】，若细胞大部 分变圆并脱落，迅速拿【ná】回操作台【tái】，轻敲几下养瓶后加少量培【péi】养基终止消化。按【àn】6-8ml/瓶补【bǔ】加【jiā】培养基，轻轻打【dǎ】匀后吸出【chū】，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养【yǎng】液【yè】后吹匀【yún】。将【jiāng】细胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中。

 
细【xì】胞冻【dòng】存：待细【xì】胞生长状态良好时，可【kě】进行细【xì】胞冻存。贴壁细胞【bāo】冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶【méi】，细胞变圆脱【tuō】落后，加入约lml含血【xuè】清的培养【yǎng】基【jī】后加入冻存管中，再【zài】添加10%DMSO后进行冻存【cún】。

 
注意事项：
收到细胞【bāo】后，若发【fā】现干【gàn】冰己挥发干【gàn】净、冻存管瓶盖【gài】脱落、破【pò】损及细胞有污染，请立即与【yǔ】我【wǒ】们电联。
所有【yǒu】动物细胞均视为有潜在的生【shēng】物危【wēi】害性，必须在二【èr】级【jí】生【shēng】物安全台内操【cāo】作，并请注意防【fáng】护，所有废液及【jí】接触过此细胞的器【qì】皿需要灭菌后方能丢弃瓶中。

 
细胞特性：
1)来源：十二指肠
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人十二脂肠腺癌 (HuTu-80)运【yùn】输和保存：使用含有胎牛血清的2ml冻存管发送存【cún】活【huó】细胞。收到细胞后，可在【zài】1000RPM，常温【wēn】条【tiáo】件下【xià】，离【lí】心5min后，于洁净【jìng】操作台弃去上【shàng】清，加入推荐使用的培养基后转移至l〇cm培【péi】养皿或者T25培养瓶【píng】中培养，传【chuán】代【dài】达【dá】到细胞生长状态良好时，再进【jìn】行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。