人静脉内皮细胞 （HUV-EC）

人静脉内皮细胞 (HUV-EC)
细胞介绍：
该细胞来源【yuán】于人静【jìng】脉【mò】内皮【pí】，可在半固体培养基中形成克隆【lóng】，在免疫抑制小【xiǎo】鼠【shǔ】中不能形成肿瘤。
 
细胞接收后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在【zài】显微【wēi】镜下【xià】确认细胞生【shēng】长状态，酒【jiǔ】精消毒瓶壁【bì】并将T25瓶置于37°C培养约 2-3h。
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细【xì】胞长满80%-90%请及时进行细胞传代，传代培【péi】养用【yòng】本公【gōng】司【sī】附带的*
培养基。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 F-12K 培【péi】养基(F-12K:SIGMA,添加【jiā】 0.1 mg/ml 肝素;0.9-22.05 mg/ml内皮细胞生长因【yīn】子【zǐ】)，90%;胎牛血清，10%。

2.培【péi】养条件：气相：空气【qì】，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度：37摄氏度，培养箱【xiāng】湿度【dù】为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇【yáo】晃解冻，加入【rù】4mL培养基混合【hé】均匀【yún】。在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后【hòu】吹匀【yún】。然后将【jiāng】所有细【xì】胞悬液【yè】加入培养瓶【píng】中培养过夜（或将细胞【bāo】悬液加入10cm皿中【zhōng】，加【jiā】入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人静脉内皮细胞 (HUV-EC)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗【xǐ】细【xì】胞9-22次。力【lì】口2m丨消【xiāo】化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱【xiāng】中消化9-22分钟【zhōng】，然后在【zài】显微【wēi】镜下观【guān】察细【xì】胞消化情况【kuàng】，若【ruò】细胞大【dà】部分变【biàn】圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少【shǎo】量培养基终止消化。按6-8ml/瓶【píng】补加培养基，轻轻【qīng】打【dǎ】匀后吸出【chū】，在【zài】1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养液后吹匀。将【jiāng】细胞悬液按1: 2到【dào】1: 5的比【bǐ】例分到【dào】新的含8ml培养基的新皿中【zhōng】或者【zhě】瓶中。

 
3)细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细【xì】胞冻存时【shí】，弃去培养基后【hòu】，PBS清洗瓶底9-22次后加入lml胰酶，细胞【bāo】变圆脱落后，加【jiā】入2ml*培养基【jī】终止消化【huà】，可使用血球【qiú】计数板【bǎn】计【jì】数。lOOOrpm离心分钟去掉【diào】上清。用血清重悬【xuán】浮，加DMSO至终浓度为【wéi】10%。加入DMSO后迅速混【hún】匀【yún】，按每lml的数量分【fèn】配到冻存管【guǎn】中，注意冻存管做好标【biāo】识。本公司【sī】按每个冻存管细【xì】胞【bāo】数目【mù】大于1X106个细胞冻存。将冻【dòng】存【cún】管置于程序降温盒中，放入-80度冰【bīng】箱【xiāng】，至少【shǎo】2个小【xiǎo】时以后转【zhuǎn】入液氮灌储存【cún】。记录冻存管位【wèi】置以便下次拿取。

 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰【bīng】己挥发【fā】干净、冻存管瓶【píng】盖脱落、破【pò】损及细胞有污染，请立【lì】即与【yǔ】我们【men】电联。
所有动物细胞均视为有潜【qián】在的生物危害性【xìng】，必须在二级生物安全【quán】台内操作，并请【qǐng】注意防【fáng】护【hù】，所有废液【yè】及接触过此细【xì】胞的器【qì】皿需【xū】要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：人静脉内皮
2)形态：内皮细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人静脉内皮细胞 (HUV-EC)运【yùn】输和保存：可选择干冰运输及发【fā】送复苏【sū】存【cún】活细胞方式：（1)干冰运输，收【shōu】到【dào】后【hòu】立即转入【rù】液氮或【huò】者-80度冰箱冻存【cún】或直接复苏；

（2)存【cún】活细【xì】胞，收到后应【yīng】继续生【shēng】长，传代达到细【xì】胞生长【zhǎng】状态良好时，再进【jìn】行冻【dòng】存。具体操作见细【xì】胞培养步骤。收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们电联。

细胞用途：仅供使用。