子宫内膜癌细胞 （Ishikawa）

子宫内膜癌细胞 (Ishikawa)
细胞培养步骤:
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 D/F12 培养基【jī】(GIBCO，10565-018)，90%;胎牛血【xuè】清【qīng】，10%。
2. 培养【yǎng】条件：气【qì】相：空气，95%;二氧化碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度【dù】，培【péi】养【yǎng】箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现用现【xiàn】配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬液的【de】冻存管【guǎn】在【zài】37°C水浴中迅速【sù】摇晃解冻，加入4mL培养基混合【hé】均匀【yún】。在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃去上清【qīng】液，补【bǔ】加l-2mL培养【yǎng】基后吹匀。然后将所有细【xì】胞悬液加入培【péi】养瓶中培养过夜【yè】（或将细胞悬【xuán】液加入【rù】l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
子宫内膜癌细胞 (Ishikawa)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上清，用不含钙、镁离子【zǐ】的PBS润洗【xǐ】细胞9-22次。力口【kǒu】2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于【yú】37°C培养箱中消化9-22分钟【zhōng】，然后在显微镜下【xià】观察细胞消化【huà】情【qíng】况，若细胞【bāo】大【dà】部分变圆并脱【tuō】落，迅【xùn】速【sù】拿回操作台【tái】，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终【zhōng】止消【xiāo】化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出在1000RPM条件下离【lí】心4分【fèn】钟，弃去上清液【yè】，补加l-2mL培养【yǎng】液后吹匀。将【jiāng】细胞悬【xuán】液【yè】按1: 2到1: 5的【de】比例分到新的含【hán】8ml培养基的新皿中或【huò】者瓶中。

 
3)细胞冻存：待细胞生长【zhǎng】状态良好时，可进行细胞冻【dòng】存。贴壁【bì】细胞冻存时【shí】，弃【qì】去培养【yǎng】基后加入少量胰酶，细胞变圆脱【tuō】落后，加入约lml含血清的培养基【jī】后加入【rù】冻存【cún】管中，再添【tiān】加1〇%DMSO后进行冻存。

 
注意事项：
收到细胞后，若发【fā】现干【gàn】冰己【jǐ】挥发干净、冻【dòng】存管瓶【píng】盖脱落、破损及细胞有污染，请【qǐng】立即【jí】与我们电联。
所有动【dòng】物【wù】细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生【shēng】物安全台【tái】内操作【zuò】，并请注意防护，所有废液【yè】及接【jiē】触过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性:
1)来源：子宫内膜癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
子宫内膜癌细胞 (Ishikawa)运输和【hé】保存【cún】：使用含有胎牛血【xuè】清【qīng】的2ml冻存管【guǎn】发送存活【huó】细胞。收到细【xì】胞后，可在1000RPM，常温条【tiáo】件下，离心5min后【hòu】，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养【yǎng】基后转移至l〇cm培养皿或者T25培【péi】养【yǎng】瓶中【zhōng】培养，传代达【dá】到细胞生长状态【tài】良好【hǎo】时，再进【jìn】行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。