人膀胱移行细胞癌细胞 （J82）

人膀胱移行细胞癌细胞 (J82)
细胞介绍：
电子显微镜【jìng】下可观【guān】察到数目【mù】不同【tóng】的粗面内质网【wǎng】和突出微丝。含raMH-ras)癌基【jī】因。 
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备MEM培【péi】养基(MEM，GIBCO，添加NaHC031.5g八【bā】，丙酮 酸钠O.llg八【bā】)，90%;胎牛【niú】血清，10%。
2.培养条件【jiàn】：气【qì】相：空【kōng】气，95%;二【èr】氧化【huà】碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3. 冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配。液【yè】氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水【shuǐ】浴中迅速摇晃解冻【dòng】，加入【rù】4mL培养基混合均匀。在【zài】1000RPM条件下离【lí】心【xīn】4分【fèn】钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然【rán】后将【jiāng】所有细胞悬【xuán】液【yè】加入培养瓶中培养过夜（或将细【xì】胞悬液加入【rù】l〇cm皿中【zhōng】，加【jiā】入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检 查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人膀胱移行细胞癌细胞 (J82)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不【bú】含钙、镁离子【zǐ】的PBS润洗细胞【bāo】9-22次。力口【kǒu】2m丨消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶中，置于37°C培【péi】养箱中消【xiāo】化9-22分钟，然后在显【xiǎn】微镜下观察细胞消化【huà】情况，若细胞大【dà】部 分变圆【yuán】并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下【xià】培养瓶【píng】后加少量【liàng】培养【yǎng】基终止消化。按6-8ml/瓶补加【jiā】培养基，轻轻打匀后吸【xī】出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清【qīng】液，补【bǔ】加l-2mL培养液后吹匀。将【jiāng】细胞【bāo】悬液按1: 2到1: 5的比例【lì】分到新的含8ml培养基的新皿中【zhōng】或者瓶中【zhōng】。

 
细【xì】胞冻存：待【dài】细【xì】胞生【shēng】长【zhǎng】状态良好时，可进行细胞冻【dòng】存。贴壁【bì】细胞冻存时，弃去【qù】培养基后加入【rù】少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约lml含血清的培养基后加入【rù】冻存管中，再【zài】添【tiān】加1〇%DMSO后进行冻存【cún】。

 
注意事项：
收到【dào】细胞后，若发【fā】现干冰己【jǐ】挥发干净、冻存管瓶盖脱落【luò】、破损及细胞【bāo】有污染，请立【lì】即与我们电联【lián】。
所【suǒ】有动【dòng】物【wù】细胞均视为有潜在的【de】生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请【qǐng】注【zhù】意防【fáng】护【hù】，所有废液及【jí】接触过【guò】此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃瓶中。 

细胞特性
1)来源：膀胱移行细胞癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人膀胱移行细胞癌细胞 (J82)运输和保存【cún】：使用含有【yǒu】胎【tāi】牛【niú】血【xuè】清的2ml冻存管发送存活细胞。收到【dào】细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于【yú】洁净【jìng】操作台【tái】弃【qì】去上清，加入【rù】推荐使用的培养【yǎng】基【jī】后转移至l〇cm培养皿或者【zhě】T25培养瓶中培养，传代达【dá】到细胞生长状态【tài】良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。