人前列腺癌细胞 （LNCaP）

人前列腺癌细胞 (LNCaP)
细胞介绍：
人前列腺癌细【xì】胞LNCaP克隆FGC是从一位50岁白【bái】人男性(血【xuè】型B+)的左锁骨淋巴【bā】 结针刺活检中分离【lí】，该患者【zhě】经确诊为前列腺【xiàn】癌转【zhuǎn】移。这株细【xì】胞对【duì】5-ct-二氢睾酮(生长调节子和酸性磷酸脂【zhī】酶产物)有【yǒu】响应【yīng】。这株细胞并不形成*的【de】单层，而是形 成集落，在传代时【shí】可以用滴【dī】管反复吹吸打碎。它们仅【jǐn】仅【jǐn】轻轻地吸附在基底【dǐ】上，不 形成汇合【hé】，很快使培养基变酸【suān】。生长很慢【màn】，传【chuán】代后48小时内不应【yīng】扰动。当培养 瓶封【fēng】包后【hòu】，多数细胞从培养瓶底分【fèn】离，悬浮在【zài】培养基中。收到后【hòu】，在通常培【péi】养单 层细胞的条件下培养24到【dào】48小时，以使细胞再贴壁。此后【hòu】可以【yǐ】换上新鲜培养液。如果【guǒ】需要【yào】，培养瓶内容物可以收集，300g离【lí】心15分钟，以10毫【háo】升【shēng】培养【yǎng】液【yè】重悬 并【bìng】培养到一个【gè】单独的培养【yǎng】瓶中。请【qǐng】使用【yòng】Coming的Cellbind培养瓶培养。

 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备【bèi】 RPIVM-1640 培养基(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC03 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g八，丙酮酸钠O.llg八【bā】)，90%;胎牛血清，10%。

2. 培养条件【jiàn】：气相【xiàng】：空气【qì】，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养【yǎng】箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存【cún】液【yè】：90%*培养基，10%DMSO,现用现配。液氮【dàn】储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含有【yǒu】lmL细胞悬液【yè】的冻存【cún】管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培【péi】养基【jī】混合均匀。在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培养【yǎng】基后【hòu】吹匀。然后将所【suǒ】有细胞悬液加入培养【yǎng】瓶中【zhōng】培养过夜（或将【jiāng】 细胞【bāo】悬液【yè】加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人前列腺癌细胞 (LNCaP)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上清【qīng】，用不含钙、镁离子的PBS润【rùn】洗【xǐ】细胞9-22次。力口2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培【péi】养箱中【zhōng】消【xiāo】化9-22分钟，然【rán】后在显微镜下观察【chá】细胞消化情【qíng】况，若细胞大部分【fèn】变圆并脱【tuō】落，迅【xùn】速拿回操作台【tái】，轻敲几下培养瓶后加少量【liàng】培养基终止【zhǐ】消【xiāo】化。按【àn】6-8ml/瓶【píng】补加培养基【jī】，轻轻打匀后吸【xī】出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培养【yǎng】液后吹匀。将细【xì】胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养【yǎng】基【jī】的新皿中【zhōng】或者 瓶中【zhōng】。

 
细胞冻存：待细【xì】胞生长【zhǎng】状【zhuàng】态良好时，可进行细胞冻【dòng】存。贴壁【bì】细胞冻存时【shí】，弃去培养基后【hòu】加入【rù】少量胰酶，细【xì】胞变圆脱落后，加【jiā】入约lml含血【xuè】清【qīng】的培养基后加入冻【dòng】存【cún】管中，再添加1〇%DMSO后进行【háng】冻存。

 
注意事项：
收到细胞【bāo】后，若发【fā】现干冰己挥发干净【jìng】、冻存管瓶【píng】盖脱落、破损及细胞【bāo】有【yǒu】污【wū】染【rǎn】，请立即与我们电联。
所【suǒ】有动物细【xì】胞均视为有潜在的生【shēng】物危【wēi】害性，必须在二级生物安全台内操作，并【bìng】请注意防护【hù】，所有废液及接触【chù】过此【cǐ】细【xì】胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：前列腺；左锁骨淋巴结癌转移灶
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人前列腺癌细胞 (LNCaP)运输和保存：可选【xuǎn】择干冰运输及发【fā】送复【fù】苏存活细胞【bāo】方式：（1)干冰运输，收到【dào】后立即转【zhuǎn】入【rù】液【yè】氮冻存或直接复苏；（2)存活【huó】细【xì】胞，收到后应继【jì】续生长，传代达到【dào】细胞【bāo】生长状态良【liáng】好时，再进行冻存。具体操作见【jiàn】细胞【bāo】培养步【bù】骤。

细胞用途：仅供使用。