人正常肝细胞 （L-02）

人正常肝细胞 (L-02)
细胞介绍：
L-02细胞建系鉴定于1980年。该细【xì】胞【bāo】是一株正常肝细【xì】胞系，具【jù】有典型的肝细胞【bāo】形态【tài】学特【tè】征，可用于多种实【shí】验研究。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培【péi】养基【jī】(RPMI-1640:GIBCO)，80%;北美胎【tāi】牛血【xuè】清，20%。
2.培养条【tiáo】件【jiàn】：气相：空【kōng】气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度【dù】：37摄氏度，培养箱 湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞【bāo】：将含有lmL细胞【bāo】悬液的冻【dòng】存管【guǎn】在37°C水浴中【zhōng】迅【xùn】速摇晃解冻【dòng】，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟，弃去上【shàng】清液，补加l-2mL培养基后【hòu】吹【chuī】匀。然【rán】后将所有细【xì】胞悬液加入培养瓶中培养过夜【yè】（或将【jiāng】 细胞【bāo】悬液加入l〇cm皿中，加入约【yuē】8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检 查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人正常肝细胞 (L-02)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上【shàng】清【qīng】，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-22次。力【lì】口2m丨消【xiāo】化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养【yǎng】瓶中，置于37°C培养箱中消化9-22分钟【zhōng】，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞【bāo】大部分【fèn】变圆【yuán】并【bìng】脱落，迅速拿回【huí】操作【zuò】台，轻敲几下培养瓶【píng】后【hòu】加少量培养基终止【zhǐ】消【xiāo】化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后【hòu】吸出，在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养液后【hòu】吹匀。将细胞悬【xuán】液按1: 2到【dào】1: 5的比例分到新【xīn】的含【hán】8ml培养基的新皿中或者【zhě】瓶中【zhōng】。

 
细胞冻存：待细【xì】胞生长状【zhuàng】态良好时，可进【jìn】行细【xì】胞冻存。贴壁细【xì】胞冻存时，先要【yào】消化处理并进行细【xì】胞计数【shù】。消化方法按照细胞传代方法的【de】9-22步【bù】骤进行，后的重悬液使用血清。加DMSO至终【zhōng】浓【nóng】度【dù】为10%，加入DMSO后【hòu】迅速混匀，按每lml的数量分配【pèi】到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于 1X106个细胞冻存。

 
注意事项：
收【shōu】到【dào】细胞后，若发现干冰己挥发【fā】干净、冻存管瓶盖【gài】脱落【luò】、破损及细胞【bāo】有【yǒu】污染，请立即与我【wǒ】们电联。
所有动【dòng】物细胞均视【shì】为有潜在的生物危【wēi】害性，必【bì】须在二级生【shēng】物安全台内操作【zuò】，并请【qǐng】注意防护，所【suǒ】有废液及接触过此细胞的器皿【mǐn】需要灭菌后方能丢弃瓶中。

 
细胞特性：
1)来源：肝脏
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人正常肝细胞 (L-02)运输和保存：使用含有胎牛血【xuè】清的2ml冻存管发送存【cún】活细胞。收【shōu】到细胞后，可在1000RPM，常【cháng】温条件下【xià】，离心5min后，于洁【jié】净操作台弃【qì】去上【shàng】清，加入推荐使用的培养基后转移至l〇cm培养皿【mǐn】或者【zhě】T25培【péi】养瓶中培【péi】养，传代达到细胞生【shēng】长状态良好【hǎo】时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。