人结直肠腺癌细胞（LoVo）

人结直肠腺癌细胞(LoVo)
一.培养基及培养冻存条件准备：
1.准备F-12K培【péi】养基（F-12K，GIBC0)，90%;胎牛血【xuè】清，10%。
2. 培养【yǎng】条件【jiàn】：气相【xiàng】：空气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液【yè】：90%*培养基，10%DMSO,现用现【xiàn】配。液氮储存。
 
1)复苏细胞：将含有lmL细胞悬液【yè】的冻存管在【zài】37°C水浴中迅速摇晃解冻，加入【rù】4mL培【péi】养基【jī】混合【hé】均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上【shàng】清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后【hòu】将所有细胞悬【xuán】液【yè】加入【rù】培养瓶中培养【yǎng】过夜（或将细胞悬液加【jiā】入l〇cm皿【mǐn】中【zhōng】，加入约【yuē】8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 

2)细胞【bāo】传代：如【rú】果细胞密度达80%-90%，即可进行传【chuán】代培【péi】养。
 
人结直肠腺癌细胞(LoVo)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培【péi】养上【shàng】清，用不含钙、镁离子的PBS润洗【xǐ】细胞【bāo】9-22次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培养箱【xiāng】中消【xiāo】化9-22分钟，然后在【zài】显微镜下观察细胞消【xiāo】化情况，若细胞大部分【fèn】变圆【yuán】并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培【péi】养瓶后【hòu】加少量【liàng】培养基终止消化。按【àn】6-8ml/瓶补【bǔ】加培养基【jī】，轻【qīng】轻打匀后吸出，在1000RPM条件下心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀【yún】。将细胞悬液【yè】按1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到新的含8ml培养【yǎng】基的新【xīn】皿中或【huò】者瓶中。

 
细胞冻【dòng】存：待细胞【bāo】生长【zhǎng】状态良好时，可【kě】进行细胞冻存【cún】。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入【rù】少量胰酶，细【xì】胞变圆脱落【luò】后【hòu】，加入约lml含血清的培【péi】养【yǎng】基后加入冻存管中，再添【tiān】加1〇%DMSO后进行冻存。

 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管【guǎn】瓶盖脱落、破【pò】损及细【xì】胞【bāo】有【yǒu】污染，请立即与我【wǒ】们电联【lián】。
所【suǒ】有【yǒu】动物细胞均【jun1】视为有潜在的生物危【wēi】害性【xìng】，必须在【zài】二级生【shēng】物安【ān】全台内操作【zuò】，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：结直肠腺癌
2)形态：上皮样细胞，贴壁生长
3)含量：>lxl01 2 * * * 6 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人结直肠腺癌细胞(LoVo)运输【shū】和保存：使用含有胎牛【niú】血清的【de】2ml冻存管发【fā】送存活细胞。收到【dào】细胞后，可在1000RPM，常温条【tiáo】件下，离心【xīn】5min后【hòu】，于洁净操作台【tái】弃去上清，加【jiā】入【rù】推荐使用【yòng】的培养【yǎng】基后转【zhuǎn】移【yí】至l〇cm培养【yǎng】皿或者T25培养【yǎng】瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤：