人肝星形细胞（LX-2）

人肝星形细胞(LX-2)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备【bèi】 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO)，90%;胎牛血【xuè】清，10%。
2. 培养条件：气相：空【kōng】气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37摄【shè】氏【shì】度【dù】，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻【dòng】存【cún】液：90%*培养基，10%DMSO,现用【yòng】现配【pèi】。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液【yè】的【de】冻存管【guǎn】在37°C水浴【yù】中【zhōng】迅速摇【yáo】晃解【jiě】冻，加入【rù】4mL培养基混合【hé】均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上【shàng】清液，补【bǔ】加l-2mL培养基后吹匀【yún】。然后将所有细胞悬【xuán】液加【jiā】入培养瓶【píng】中【zhōng】培养过夜【yè】（或将细胞悬液加入【rù】l〇cm皿中，加【jiā】入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肝星形细胞(LX-2)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上【shàng】清【qīng】，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-22次。力口2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养【yǎng】瓶【píng】中，置于37°C培养箱中【zhōng】消化9-22分钟，然【rán】后在【zài】显微镜下观察细【xì】胞消【xiāo】化情【qíng】况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回【huí】操【cāo】作台，轻【qīng】敲【qiāo】几下培养瓶后加少【shǎo】量培养基终【zhōng】止消化。按6-8ml/瓶【píng】补加【jiā】培养基，轻轻打【dǎ】匀后吸出，在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃去【qù】上清液，补加l-2mL培养液后【hòu】吹匀【yún】。将细【xì】胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含【hán】8ml培养基的【de】新皿【mǐn】中或者瓶中。

 
3)细【xì】胞冻存：待细胞生长【zhǎng】状态良好时，可进行细胞冻【dòng】存。贴壁细胞冻存【cún】时，弃【qì】去培养基后加【jiā】入少量胰酶，细胞变圆脱【tuō】落【luò】后【hòu】，加入约lml含【hán】血清的培【péi】养基后加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻【dòng】存。

 
注意事项：
收【shōu】到细胞后，若发现【xiàn】干冰【bīng】己挥发干净【jìng】、冻存【cún】管【guǎn】瓶盖脱落、破损及细【xì】胞有污染，请立即与我【wǒ】们电联。
所【suǒ】有动物细胞均【jun1】视为有潜在的生物危害性【xìng】，必须在二级【jí】生【shēng】物安全台内操作【zuò】，并【bìng】请注意【yì】防【fáng】护，所有废液及接触过此细胞的【de】器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：肝
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肝星形细胞(LX-2)运输和保存【cún】：使用含有胎牛血清【qīng】的【de】2ml冻存【cún】管发送存活细胞。收到细胞后，可【kě】在【zài】1000RPM，常温【wēn】条件【jiàn】下【xià】，离心5min后，于洁净操作【zuò】台弃【qì】去上清，加入推荐使用的培养【yǎng】基后转【zhuǎn】移【yí】至【zhì】l〇cm培养皿或者【zhě】T25培【péi】养瓶中培养，传【chuán】代达到细胞生长 状【zhuàng】态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。