人ruxian癌阿霉素耐药细胞（MCF-7/Adr

人ruxian癌阿霉素耐药细胞(MCF-7/Adr)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
注【zhù】意：培养【yǎng】瓶里面的培养液是不【bú】含药物的【de】，待细【xì】胞长到【dào】9-22%汇合度【dù】时，去掉培养液，加【jiā】含500ng/ml阿霉素药物的培养液，放入【rù】培养箱，这段【duàn】时间会有少部分【fèn】细胞【bāo】悬【xuán】浮起【qǐ】来，属于正常情况，通过【guò】换液可【kě】以去掉，等细胞长【zhǎng】满就可以消化 传【chuán】代了，这时【shí】可以一直用含药【yào】物培养基来培养细胞，两【liǎng】代之后【hòu】就【jiù】可以【yǐ】将药物【wù】浓 度提髙到l〇〇〇ng/ml，细胞冻存【cún】时不要在培养基中加药【yào】物。

1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO);北美胎【tāi】牛【niú】血清 (United States, GIBCO)，

10%;双抗 1%，添加 2mML-GUJ，添加【jiā】 luM Adr。
2.培养条【tiáo】件：气相【xiàng】：空【kōng】气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱 湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
1.复苏细胞：将【jiāng】含有lmL细胞悬液【yè】的冻【dòng】存【cún】管在37°C水浴中【zhōng】迅速摇晃【huǎng】解冻，加【jiā】入4mL培【péi】养基混合均匀。在1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃【qì】去上清液，补【bǔ】加【jiā】l-2mL培养基【jī】后【hòu】吹匀。然后将所有【yǒu】细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将 细胞悬液加入【rù】l〇cm皿中【zhōng】，加入【rù】约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检 查细胞密度。

2.细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进【jìn】行【háng】传代培养。弃去培养上清，用不【bú】含钙【gài】、镁【měi】离【lí】子的【de】PBS润洗细胞9-22次。力口2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置于37°C培养箱中消化9-22分钟，然后在显微镜【jìng】下观察细胞【bāo】消【xiāo】化情况，若细胞【bāo】大部 分变【biàn】圆并脱落，迅速【sù】拿回操【cāo】作台，轻敲几下培养【yǎng】瓶【píng】后加少量【liàng】培养基终止消【xiāo】化。按6-8ml/瓶【píng】补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培养液后吹匀【yún】。将细【xì】胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到新的含【hán】8ml培养【yǎng】基的新皿中或者瓶中。

 
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清【qīng】洗【xǐ】瓶【píng】底9-22次后加入lml胰酶，细胞变【biàn】圆脱落【luò】后，加入【rù】2ml*培养基【jī】终止消化【huà】，可使用血球【qiú】计数板计【jì】数。1000RPM离心5分钟去掉上清。用【yòng】血清重悬浮，加【jiā】DMSO至终浓【nóng】度【dù】为 10%。加入DMSO后迅速【sù】混匀，按每lml的数量分【fèn】配【pèi】到【dào】冻存管【guǎn】中，注意冻存管做好标【biāo】识【shí】。本公司按每个冻存管细胞数目【mù】大于【yú】1X106个细胞冻存【cún】。将冻存管【guǎn】置于程序降温盒中【zhōng】，放入-80度【dù】冰箱，至少2个小时以【yǐ】后转入【rù】液氮灌【guàn】储存。记录冻存管位置以便下次拿【ná】取。

 
人ruxian癌阿霉素耐药细胞(MCF-7/Adr)注意事项：
收到细胞后【hòu】，若【ruò】发现【xiàn】干冰己挥发干净、冻存【cún】管瓶【píng】盖【gài】脱落、破损及细胞有污染【rǎn】，请立即与我们电【diàn】联。
所【suǒ】有【yǒu】动物【wù】细胞均【jun1】视为有潜在【zài】的生物危害性，必【bì】须【xū】在二级生物安全台内操作，并请注意【yì】防护，所有废液及【jí】接触过此细胞的器皿【mǐn】需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：ruxian癌
2)形态：上皮细胞样贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人ruxian癌阿霉素耐药细胞(MCF-7/Adr)运输和保存：可选【xuǎn】择【zé】干冰运输及发送复【fù】苏存活细胞方式【shì】：（1)干冰运输，收到【dào】后立【lì】即转【zhuǎn】入液氮冻存或直接复【fù】苏【sū】；（2)存活细胞

，收到后应继续生长，传代达【dá】到【dào】细胞生长【zhǎng】状态良好【hǎo】时，再【zài】进【jìn】行冻存。具体操作见细胞【bāo】培养步骤。
细胞用途：仅供使用。