前列腺癌细胞（MDA-PCa-2b）

前列腺癌细胞(MDA-PCa-2b)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 F-12K 培养基【jī】（F-12K: GIBCO)，添加【jiā】 25 ng/mL霍乱毒【dú】素,10 ng/mL小鼠表【biǎo】皮生长因【yīn】子,0.005 mM磷酸乙醇胺,,,0.005 mg/mL牛胰岛素；胎牛血【xuè】清【qīng】，20%。

2.培养条【tiáo】件：气【qì】相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄【shè】氏度，培养【yǎng】箱湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液【yè】：90%*培养基【jī】，10%DMSO,现用现配。液氮【dàn】储存。
  
2)细胞处理：
复【fù】苏细【xì】胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬液【yè】的冻存管在37°C水【shuǐ】浴【yù】中迅速摇【yáo】晃解冻，加入4mL培【péi】养基混合均匀。在【zài】1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃去上【shàng】清液，补加【jiā】l-2mL培【péi】养基后【hòu】吹匀。然后将【jiāng】所有细胞悬液加入培养瓶中培【péi】养【yǎng】过夜（或【huò】将【jiāng】细胞【bāo】悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
前列腺癌细胞(MDA-PCa-2b)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不【bú】含【hán】钙、镁离子的【de】PBS润洗【xǐ】细胞9-22次。力口2m丨消化【huà】液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中【zhōng】消化【huà】9-22分钟，然后在显微镜下观察细胞消【xiāo】化【huà】情况，若细胞大【dà】部【bù】 分变【biàn】圆并脱落【luò】，迅速拿回【huí】操作台，轻敲几下培养瓶后【hòu】，加少量培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加【jiā】培养基，轻轻【qīng】打匀后吸出，在【zài】1000RPM条件下离【lí】心4分【fèn】钟，弃去上清【qīng】液，补加【jiā】l-2mL培养液，后【hòu】吹匀【yún】。将细【xì】胞悬液按1: 2到1: 5的【de】比例分【fèn】到新的含8ml培养基的新皿中或者 瓶中【zhōng】。

细胞冻存：待【dài】细胞生长状态良好时，可进行细【xì】胞冻存。贴壁【bì】细胞冻存时【shí】，弃去培【péi】养基【jī】后加入【rù】少量胰【yí】酶，细胞变圆脱落后，加入

约lml含【hán】血清【qīng】的【de】培【péi】养基后加入冻【dòng】存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若【ruò】发【fā】现干冰【bīng】己挥发干净、冻存【cún】管瓶【píng】盖脱落、破损及细胞有【yǒu】污【wū】染，请【qǐng】立即与我们电联。
所有动物细胞均视为【wéi】有潜在的【de】生物危害性，必须在二级生【shēng】物安全台【tái】内操作，并【bìng】请注【zhù】意防【fáng】护，所有【yǒu】废液及【jí】接触过此细胞的器皿需【xū】

要灭菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：前列腺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
前列腺癌细胞(MDA-PCa-2b)运输和保存：使用含【hán】有【yǒu】胎牛血清的2ml冻存管发送【sòng】存活细【xì】胞。收到细胞后， 可【kě】在1000RPM，常温条件【jiàn】下，离心5min后【hòu】，于洁

净操作台弃【qì】去上【shàng】清，加入推荐【jiàn】使用的培养【yǎng】基【jī】后转移至l〇cm培养皿【mǐn】或【huò】者T25培养瓶中培养，传代达到细【xì】胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。