人膜间皮细胞（MeT-5A）

人膜间皮细胞(MeT-5A)
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 Medium 199 培养基(添加 NaHC031.5g/L, 3.3 nM EGF，870门1/1牛胰岛素【sù】，20阳【yáng】1/11^?￡5，

3.87呢八1"1256〇3)，90%;胎牛血清，10%。
2.培养条件：气【qì】相【xiàng】：空气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温度：37°C，培养【yǎng】箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞：将含【hán】有lmL细胞悬【xuán】液的【de】冻存管迅速【sù】放入【rù】37°C水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇【yáo】晃解冻，移入事先【xiān】准【zhǔn】备好的含有4mL

培养基的15ml离【lí】心管【guǎn】中混【hún】合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃【qì】去上清液，加【jiā】入【rù】lmL培 养基【jī】后吹匀。然后将所有细胞【bāo】悬液【yè】移

入含有5ml培养基【jī】的培养瓶中培【péi】养过夜【yè】。 第二天换【huàn】液并检查细【xì】胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人膜间皮细胞(MeT-5A)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培养上清，用【yòng】不含【hán】钙、镁离子【zǐ】的【de】PBS润洗细胞9-22次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶【píng】中，置于37°C培养箱中消【xiāo】化【huà】9-22分钟【zhōng】，然后在显微镜下观察细胞消【xiāo】化情况，若【ruò】细胞大部分变圆并脱【tuō】落【luò】，迅速拿回操作台，轻敲几【jǐ】下【xià】培养瓶后加入3ml此细胞的培【péi】养基终止消化。轻轻吹打后吸出，移入15ml离【lí】心管中，在1000RPM条件下离心4分【fèn】钟，弃去上清液【yè】，加入lmL培【péi】养液后吹匀。移入到事先【xiān】准备好的含【hán】有5ml培【péi】养基的【de】T-25培养瓶中或【huò】含有14ml培养基【jī】的T-75培养瓶中培养。

 
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进【jìn】行细胞冻存。贴壁细【xì】胞【bāo】冻存【cún】时，先要消化处理【lǐ】并进行细胞计【jì】数【shù】。消化方【fāng】法【fǎ】按照细胞传代方法的9-22步骤进行【háng】， 后的重【chóng】悬液【yè】使用血清。悬浮细胞直接计【jì】数后【hòu】离心，用血清重悬浮【fú】，加DMSO 至终浓度为10%。加入【rù】DMSO后迅速混匀，按【àn】每lml的数【shù】量分配到冻【dòng】存管中。本公司按【àn】每个冻存管细胞数目大于1X106个【gè】细胞【bāo】冻存。

 
注意事项：
收到【dào】细胞后【hòu】，若发现【xiàn】干【gàn】冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱【tuō】落、破损及【jí】细【xì】胞有污染，请立即与我们【men】电联。
所有【yǒu】动物细【xì】胞【bāo】均视【shì】为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全【quán】台内操【cāo】作，并请注意防护，所有废液及接触【chù】过此细胞【bāo】的器【qì】皿需【xū】要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：间皮
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人膜间皮细胞(MeT-5A)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微镜下【xià】确认【rèn】细胞生长状态【tài】，去【qù】掉封【fēng】口膜并将T25瓶置于37°C培养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4. 如果细胞长【zhǎng】满（90%以上）请及时【shí】进行细胞传代，传代培养用6ml本公【gōng】司附带【dài】的*培养基。
5.接到【dào】细胞次日【rì】，请检查细胞是【shì】否污【wū】染，若发【fā】现污【wū】染或【huò】疑似污【wū】染，请及时与我们取得电联。
细胞用途：仅供使用。