人骨肉瘤细胞（MG-63）

人骨肉瘤细胞(MG-63)
细胞介绍：
用聚【jù】次【cì】核苷-聚胞嘧啶核苷酸和放【fàng】线菌素D可以诱导产生高水【shuǐ】平的干【gàn】扰【rǎo】素。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备MEM培【péi】养基(MEM，GIBCO)，90%;胎【tāi】牛【niú】血清，10%。
2.培养【yǎng】条【tiáo】件：气相：空气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养【yǎng】箱湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存【cún】液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配。液【yè】氮储存【cún】。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含有lmL细胞【bāo】悬液【yè】的冻存管在37°C水【shuǐ】浴中【zhōng】迅【xùn】速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离【lí】心【xīn】4分钟，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培【péi】养【yǎng】基后【hòu】吹匀。然后将所有细【xì】胞悬液【yè】加入【rù】培养瓶【píng】中培养过夜（或将细胞悬【xuán】液加【jiā】入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检 查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人骨肉瘤细胞(MG-63)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清【qīng】，用不含钙、镁离子的【de】PBS润【rùn】洗【xǐ】细胞9-22次。力【lì】口2m丨消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-22分钟【zhōng】，然后【hòu】在显微镜下观察细胞【bāo】消【xiāo】化【huà】情况，若细胞大部 分变圆【yuán】并脱落，迅【xùn】速拿回操作【zuò】台，轻敲几下培【péi】养瓶后加【jiā】少量培养基终【zhōng】止消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀【yún】后吸【xī】出，在1000RPM条件【jiàn】下【xià】离心4分钟，弃【qì】去【qù】上清液，补加l-2mL培养液后吹【chuī】匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的【de】含8ml培养【yǎng】基的新皿中或者 瓶中。

 
细胞【bāo】冻【dòng】存：待【dài】细【xì】胞生【shēng】长状【zhuàng】态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻【dòng】存时，弃去培【péi】养【yǎng】基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入【rù】约lml含血清的培养基后加【jiā】入冻存管【guǎn】中，再添加1〇%DMSO后【hòu】进行【háng】冻【dòng】存【cún】。

 
注意事项：
收到细胞后，若发现【xiàn】干【gàn】冰己挥发干净、冻存管【guǎn】瓶盖【gài】脱落、破【pò】损及细胞有【yǒu】污染，请立即与我们电联。
所有【yǒu】动物细胞均视为有【yǒu】潜【qián】在的生物危害性【xìng】，必须在二【èr】级生【shēng】物安全台内操【cāo】作，并【bìng】请注【zhù】意防护【hù】，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：骨肉瘤
2)形态：成纤维细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人骨肉瘤细胞(MG-63)运【yùn】输和保存：使用含【hán】有胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞【bāo】。收到细胞【bāo】后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁【jié】净【jìng】操作台【tái】弃去上清【qīng】，加入推荐使用的培【péi】养【yǎng】基后转移【yí】至l〇cm培养皿或者T25培养瓶中养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。