髙转移潜能肝癌细胞（MHCC-97H）

髙转移潜能肝癌细胞(MHCC-97H)
细胞介绍：
来【lái】源于中山医院，用人【rén】肝癌【ái】细胞【bāo】株MHCC97-H接种裸鼠，进行3次肺转移筛选，取肺转移瘤建成皮【pí】下接种后高度自【zì】发【fā】性肺转【zhuǎn】移的【de】肝癌细胞系

 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 DMEM 培养基(DMEM/F-12, GIBCO,添加 NaHC03 2.0g八)， 85%;马血清，10%;胎牛血清，5%。
2.培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养【yǎng】箱【xiāng】 湿【shī】度为70%-80%。
3. 冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用现配。液氮【dàn】储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含【hán】有lmL细胞悬【xuán】液的【de】冻存管在37°C水【shuǐ】浴中迅速【sù】摇晃解冻，加入【rù】4mL培【péi】养基混合均匀。在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养基后【hòu】吹匀。然后将所【suǒ】有细胞悬液【yè】加入培养【yǎng】瓶中培养【yǎng】过夜（或【huò】将细胞悬液加入l〇cm皿中，加【jiā】入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
髙转移潜能肝癌细胞(MHCC-97H)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用【yòng】不含钙、镁【měi】离子【zǐ】的PBS润洗【xǐ】细胞9-22次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置于【yú】37°C培养箱【xiāng】中消化9-22分【fèn】钟，然后在显【xiǎn】微镜下观察细胞消【xiāo】化情况，若细【xì】胞【bāo】大部分变圆并脱落，迅【xùn】速拿回操作台，轻敲【qiāo】几下培养瓶后加少量培养基终【zhōng】止消化。按6-8ml/瓶补加【jiā】培养基，轻轻打匀后吸【xī】出，在1000RPM条件【jiàn】下离【lí】心【xīn】4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养液【yè】后吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的【de】比例分到【dào】新的含8ml培养【yǎng】基的新【xīn】皿中或【huò】者瓶【píng】中。

 
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方【fāng】法一：收集细胞，1000RPM条件【jiàn】下离心4分【fèn】钟，弃去上【shàng】清液，补【bǔ】加l-2mL培养液后吹匀【yún】，将细胞悬液【yè】按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半【bàn】数换液【yè】方式，弃去半数【shù】培养【yǎng】基后，将【jiāng】剩【shèng】余细胞悬起，将细 胞悬【xuán】液按1: 2到1: 3的比例【lì】分【fèn】到新的含8ml培【péi】养基的新皿中或者瓶中。

细【xì】胞冻存：待细胞生【shēng】长状态良好时，可进行细胞冻存【cún】。贴壁细胞冻【dòng】存【cún】时【shí】，弃去培养【yǎng】基后加【jiā】入【rù】少量胰酶，细胞变圆脱落后【hòu】，加入约【yuē】lml含血【xuè】清的培养基后加入【rù】冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。悬浮【fú】细【xì】胞冻【dòng】存时，应将细胞收【shōu】集，1000RPM条件下离【lí】心4分钟，少量【liàng】保存【cún】上【shàng】清液（防止细胞吸走)，加入部分【fèn】新鲜培养基，加入到冻存【cún】管中【zhōng】，在冻存管中加入【rù】1〇%DMSO后进行冻存【cún】。

 
注意事项：
收到细胞后【hòu】，若发现干冰己挥发【fā】干净、冻存管瓶盖脱【tuō】落、破损及细胞【bāo】有污【wū】染【rǎn】，请立即与【yǔ】我们【men】电联。
所有动物细胞【bāo】均视为【wéi】有潜在的生物危【wēi】害性，必【bì】须在二级生物安全台内操作，并【bìng】请【qǐng】注意防【fáng】护【hù】，所【suǒ】有废液及接触过此细胞的器【qì】皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：肝癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
髙转移潜能肝癌细胞(MHCC-97H)运输和保存：可选择干冰运输及发【fā】送复苏【sū】存活细胞方式：（1)干冰运【yùn】输，收到后立即转【zhuǎn】入【rù】液氮冻存【cún】或直接复苏【sū】；（2)存活【huó】细胞

，收到后应继续生长【zhǎng】，传代达到细胞生长状态良【liáng】好时，再进行冻存。具体【tǐ】操作见【jiàn】细胞【bāo】培【péi】养【yǎng】步骤。
细胞用途：仅供使用。