低转移人肝癌细胞（MHCC97-L）

低转移人肝癌细胞(MHCC97-L)
细胞介绍：
该细胞来源于中山医院，生长较缓慢。
 
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备DMEM培养【yǎng】基(DMEM，GIBCO)，90%;北美胎牛血清 (United States，GIBCO)，10%。
2. 培养条【tiáo】件：气相：空【kōng】气，95%;二氧化碳，5%。温度：37°C，培养箱湿【shī】度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存【cún】管迅速放【fàng】入37°C水浴中（水面要【yào】低于冻【dòng】存【cún】管【guǎn】盖【gài】部【bù】）摇【yáo】晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的【de】15ml离心管【guǎn】中混合均匀【yún】。在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清液【yè】，加入lmL培【péi】 养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶【píng】中【zhōng】培养过夜。 第【dì】二天换【huàn】液并检【jiǎn】查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
低转移人肝癌细胞(MHCC97-L)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上清，用【yòng】不含钙、镁【měi】离子的PBS润洗细胞9-22次。力口【kǒu】2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶中【zhōng】，置于37°C培养箱【xiāng】中消化9-22分【fèn】钟，然后在显微镜下观察细【xì】胞消化情况，若【ruò】细胞大部分【fèn】变圆并脱【tuō】落，迅速【sù】拿回操作台，轻敲【qiāo】几下培养瓶后加入2ml此细胞【bāo】*培【péi】养基终止消化【huà】。轻轻吹打后吸【xī】出【chū】，移入15ml离【lí】心管中，在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去【qù】上清液，加入【rù】lmL培养液后吹匀。移入【rù】到【dào】事先准备好的含【hán】有5ml培养【yǎng】基的T-25培养瓶中【zhōng】或【huò】含有【yǒu】14ml培养基的T-75培养瓶中培养。

 
细胞冻存：待细胞【bāo】生长状态【tài】良好时，可进【jìn】行细胞冻存。贴壁细【xì】胞冻存时，先【xiān】要消化处理并进行细【xì】胞计数。消化【huà】方【fāng】法按照细胞传【chuán】代方【fāng】法【fǎ】的9-22步骤进行【háng】，后的重悬液【yè】使用血清。加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅【xùn】速【sù】混匀，按每lml的数【shù】量【liàng】分配到冻存管

中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发【fā】现干【gàn】冰己挥【huī】发干净【jìng】、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立【lì】即与我们电【diàn】联。
所有动物【wù】细胞均【jun1】视为有潜在的【de】生物危害【hài】性，必须在【zài】二级生物安全【quán】台内操作【zuò】，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：肝癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性?
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
低转移人肝癌细胞(MHCC97-L)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请【qǐng】先在显微镜下确认【rèn】细胞生长状态，去掉封口膜【mó】并【bìng】将T25瓶置于37°C培养约【yuē】 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞【bāo】长满【mǎn】（80%-90%)请及【jí】时进行【háng】细胞传代，传代培【péi】养用6ml本公司附带的*培养基。
5.接到细【xì】胞【bāo】次日，请检查细【xì】胞是否污染，若发现污【wū】染或疑似污染，请及时【shí】与我们取得电联【lián】。
细胞用途：仅供使用。