人胃癌细胞 （MKN-45）

人胃癌细胞 (MKN-45)
细胞介绍：
该细胞【bāo】系由SAkiyama建立，源于一【yī】位35岁患有印戒细【xì】胞癌【ái】的女性的胃淋巴结。
 
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO,添【tiān】加 NaHC03 1.5g/L, D-葡萄【táo】糖2.5g八，丙酮酸钠O.llg八)，80%;胎牛血清，20%。

2.培养条【tiáo】件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度【dù】：37°C，培养【yǎng】箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理： 
复【fù】苏细【xì】胞：将含有lmL细【xì】胞悬液【yè】的【de】冻存管迅速放入37°C水浴中（水【shuǐ】面要低于【yú】冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好【hǎo】的含有【yǒu】4mL培养基【jī】的15ml离心管中混【hún】合均匀。在1000RPM条【tiáo】件下离心4分【fèn】钟，弃去【qù】上清液【yè】，加入lmL培 养基【jī】后吹匀。然后将所有细胞悬液【yè】移入【rù】含有5ml培【péi】养基的【de】培养瓶中培养过夜【yè】。第二天换液并检查细胞【bāo】密度【dù】。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人胃癌细胞 (MKN-45)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不【bú】含钙、镁【měi】离【lí】子的PBS润洗细胞9-22次。力口【kǒu】2m丨消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培【péi】养瓶中【zhōng】，置于37°C培养箱中消化9-22分钟，然后在【zài】显微镜下观【guān】察【chá】细胞【bāo】消化情【qíng】况，若细胞大部【bù】分变圆并脱落，迅速拿回操作【zuò】台【tái】，轻敲【qiāo】几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。轻轻吹【chuī】打后吸出，移【yí】入15ml离心【xīn】管中【zhōng】，在【zài】1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液【yè】，加入lmL培【péi】养液后吹【chuī】匀。移入到事先准【zhǔn】备【bèi】好的含有5ml培【péi】养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基【jī】的T-75培养【yǎng】瓶中培养。

 
细胞冻存：待【dài】细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴【tiē】壁细胞冻存【cún】时【shí】，先要消化处理并进行细胞计数【shù】。消化【huà】方法按照【zhào】细胞【bāo】传代方【fāng】法的9-22步【bù】骤进行，后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后【hòu】离心，用血清重悬浮【fú】，加DMSO 至【zhì】终【zhōng】浓度为10%。加【jiā】入DMSO后迅速混匀，按每lml的【de】数量分配到冻存管中【zhōng】。本公司按每个【gè】冻存【cún】管细胞【bāo】数目大于1X106个细胞【bāo】冻存。

 
注意事项：
收到【dào】细胞【bāo】后，若发现【xiàn】干冰己挥发【fā】干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与【yǔ】我【wǒ】们电联。
所有【yǒu】动【dòng】物细胞均视为有【yǒu】潜在的生物【wù】危害【hài】性，必须在二级生物安全台内【nèi】操作，并请注意防护，所有废液及接【jiē】触【chù】过此细【xì】胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：胃癌
2)形态：圆形，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人胃癌细胞 (MKN-45)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微镜下确认细【xì】胞生【shēng】长状态，去掉封口膜并将T25瓶置【zhì】于【yú】37°C培【péi】养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果【guǒ】细胞长满（90%以【yǐ】上【shàng】）请及【jí】时进行细胞传【chuán】代，传代培【péi】养用6ml本【běn】公司附带的*培养基。
5.接【jiē】到【dào】细胞次日，请检查细胞是否【fǒu】污【wū】染，若发现污染【rǎn】或疑似污染，请【qǐng】及时与我们取【qǔ】得电联。
细胞用途：仅供使用。