人胚肺细胞 （MRC-5）

人胚肺细胞 (MRC-5)
细胞介绍：
MRC-5细胞系【xì】来自14周龄男性胎儿的【de】正常肺组【zǔ】织【zhī】，该细【xì】胞老化前能【néng】传【chuán】代42到46次群【qún】体倍增。它是正常二倍体细【xì】胞系，46, XY核型。模式染色体数为46,概率为70%。

 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 MEM 培养基(MEM:GIBCO)，北【běi】美胎【tāi】牛血清(United States， GIBCO)，15%，1% PS。
2. 培【péi】养【yǎng】条件：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温度：37摄氏度【dù】，培养箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有【yǒu】lmL细【xì】胞悬【xuán】液的冻存管在37°C水浴【yù】中迅速摇晃解冻【dòng】，加入【rù】4mL培【péi】养基混合均匀。在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培【péi】养基后吹匀【yún】。然后【hòu】将所【suǒ】有【yǒu】细胞悬液加入培养瓶【píng】中培养过夜（或将 细胞悬液加入【rù】l〇cm皿【mǐn】中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人胚肺细胞 (MRC-5)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不【bú】含钙、镁离子的PBS润洗细【xì】胞9-22次。力【lì】口【kǒu】2m丨消【xiāo】化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-22分钟，然后【hòu】在显微【wēi】镜下观察细【xì】胞消【xiāo】化情况【kuàng】，若【ruò】细胞大部【bù】分变【biàn】圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后【hòu】加【jiā】少【shǎo】量培养基终【zhōng】止消化【huà】。按6-8ml/瓶【píng】补加【jiā】培养基，轻【qīng】轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞【bāo】悬液【yè】按1: 2到1: 5的比【bǐ】例【lì】分到新的含【hán】8ml培养基的新【xīn】皿中或者瓶中。

 
细胞冻存：待细【xì】胞【bāo】生长状态良好【hǎo】时，可进行细胞冻存。贴【tiē】壁细胞【bāo】冻存时，先要消化处理并【bìng】进行细胞计数。消化【huà】方法按照【zhào】细胞【bāo】传代方法【fǎ】的9-22步【bù】骤进行，后的重悬液使用血清。悬浮细【xì】胞【bāo】直接【jiē】计数后【hòu】离心，用【yòng】血【xuè】清【qīng】重悬浮，加DMSO 至终浓度为10%。加入DMSO后迅【xùn】速【sù】混【hún】匀，按【àn】每lml的数量分配到冻存管【guǎn】中【zhōng】。本公司按每个冻存管细胞【bāo】数目大【dà】于【yú】1X106个细胞冻存。收到细胞后，若发现干冰己挥【huī】发干净、冻【dòng】存管瓶盖脱落、破损【sǔn】及细胞有【yǒu】污染，请立即与我们电联。所有动物细胞均视为【wéi】有潜在【zài】的生物危【wēi】害【hài】性，必须在二级生物安【ān】全【quán】台内操作【zuò】，并请【qǐng】注意防护，所有废液及接触【chù】过此【cǐ】细胞的器皿需【xū】要灭【miè】菌后方能丢弃。

 
注意事项:
收到细胞后，若发【fā】现干冰己挥发干净、冻存管瓶【píng】盖【gài】脱【tuō】落、破损及【jí】细胞有污染，请立即【jí】与我们电联。
所有【yǒu】动物细胞【bāo】均视为有潜在【zài】的生物危害性，必须【xū】在二级生物安【ān】全【quán】台内操【cāo】作，并请注意防护，所有废液及接【jiē】触过此【cǐ】细胞的【de】器皿需

要灭菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：肺
2)形态：成纤维细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人胚肺细胞 (MRC-5)运【yùn】输和【hé】保存【cún】：可选【xuǎn】择干冰运【yùn】输及发送复苏存活【huó】细胞方式：（1)干冰运【yùn】输，收到后立即【jí】转入【rù】液氮冻存或直接复苏；（2)存活细胞

，收到后应继续生【shēng】长，传代达到细胞【bāo】生长状态良【liáng】好时，再进行冻【dòng】存【cún】。具体【tǐ】操作见【jiàn】细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。