人肺鱗癌细胞（NCI-H226）

人肺鱗癌细胞(NCI-H226)
细胞介绍：
此细胞株于1980年分离建立。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 RPIVM-1640 培养基【jī】(RPMI-1640:GIBCO)，90%;胎牛血清，10%。
2. 培【péi】养条件：气【qì】相：空气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温度：37摄【shè】氏【shì】度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基【jī】，10%DMSO,现【xiàn】用【yòng】现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有【yǒu】lmL细胞【bāo】悬液的【de】冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻【dòng】，加入4mL培养基混合均匀【yún】。在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟【zhōng】，弃去【qù】上清液，补加l-2mL培养基后吹匀【yún】。然后【hòu】将所有细胞悬液加入【rù】培养瓶中培【péi】养过【guò】夜（或将细胞悬液【yè】加入【rù】l〇cm皿中，加入约8ml培养【yǎng】基，培养过夜【yè】）。第二天换液并【bìng】检 查细胞密【mì】度。细胞传代【dài】：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代【dài】培【péi】养。

 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养【yǎng】上清，用不含【hán】钙、镁离【lí】子的PBS润洗细胞9-22次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置于37°C培养箱【xiāng】中【zhōng】消化9-22分【fèn】钟，然后【hòu】在显微【wēi】镜【jìng】下观察细胞【bāo】消化情况，若细【xì】胞大【dà】部分变圆并脱落，迅速拿回操【cāo】作台，轻敲几下培养瓶后加少【shǎo】量培养基终【zhōng】止消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后【hòu】吸出，在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃去上清液，补【bǔ】加【jiā】l-2mL培养【yǎng】液后【hòu】吹匀。将【jiāng】细胞悬液按1: 2到1: 5的比【bǐ】例分【fèn】到新的含8ml培养基的新皿中或者【zhě】瓶中【zhōng】。

 
人肺鱗癌细胞(NCI-H226)对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养液后吹匀，将细胞【bāo】悬液【yè】按【àn】1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半数换【huàn】液方式，弃去半数培养基【jī】后，将剩余细胞悬起【qǐ】，将细胞悬液按1: 2到【dào】1: 3的【de】比例分到新【xīn】的【de】含8ml培【péi】养基【jī】的新皿中或者瓶中。

  
细【xì】胞冻【dòng】存：待细胞【bāo】生长状态良好时【shí】，可进行细胞【bāo】冻存。贴壁细胞冻【dòng】存时，弃去【qù】培养基后加入少量【liàng】胰酶，细胞变圆脱落后，加入约【yuē】lml含【hán】血清的培养基后 加入冻存管中【zhōng】，再添加1〇%DMSO后进行冻存。悬浮细胞【bāo】冻【dòng】存时，应【yīng】将细胞收集，1000RPM条【tiáo】件【jiàn】下离心4分钟【zhōng】，少量【liàng】保存上清液（防止细胞吸【xī】走)，加入部分新鲜培养基【jī】，加入到冻存管【guǎn】中，在冻存管中加入1〇%DMSO后进【jìn】行【háng】冻【dòng】 存。

 
注意事项：
收到细胞后，若发现干【gàn】冰己【jǐ】挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有【yǒu】污染，请【qǐng】立【lì】即与我们电【diàn】联。
所【suǒ】有动物细胞均【jun1】视为有潜在的生物【wù】危害性，必须在二级生物安全台【tái】内【nèi】操作，并【bìng】请注【zhù】意防护，所有废液及接触【chù】过【guò】此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：肺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肺鱗癌细胞(NCI-H226)运输和【hé】保【bǎo】存：可选【xuǎn】择干冰运输及发【fā】送复苏存【cún】活【huó】细胞方式【shì】：（1)干冰运输，收到后立即转入液氮冻【dòng】存【cún】或直接复苏；（2)存活细胞

，收【shōu】到后应继续生【shēng】长【zhǎng】，传代达到细胞生【shēng】长状态良好【hǎo】时，再进行冻存。具体操作见【jiàn】细胞培养步骤【zhòu】。
细胞用途：仅供使用。