人肺腺癌细胞（NCI-H1395）

人肺腺癌细胞(NCI-H1395)
 
细胞介绍：
这【zhè】株细胞是1986年4月建株的。患者吸烟，每年【nián】15包。ATCC CRL-5957是一株来源于【yú】同一患者的类【lèi】淋【lín】巴【bā】母细胞。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培【péi】养基(RPIVM-1640:GIBCO,添加【jiā】 NaHC03 1.5g/L, D-葡萄糖【táng】2.5g八，丙【bǐng】酮酸钠O.llg八【bā】)，90%;胎牛血清，10%。

2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度，培【péi】养箱【xiāng】湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存【cún】液【yè】：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现用现配。液【yè】氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液【yè】的冻存【cún】管在37°C水浴中迅【xùn】速【sù】摇晃解【jiě】冻，加入【rù】4mL培养基混【hún】合均匀。在1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃去上清液【yè】，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所【suǒ】有细胞悬液【yè】加【jiā】入培养瓶【píng】中培养过夜（或【huò】将 细胞悬液加入l〇cm皿【mǐn】中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上清，用不含钙【gài】、镁离子【zǐ】的PBS润洗细胞9-21次。力口【kǒu】2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培养箱中消化9-21分钟，然后在显微【wēi】镜下观察细胞消化情况【kuàng】，若【ruò】细【xì】胞大【dà】部【bù】 分变圆并脱落，迅速拿回操作台【tái】，轻敲几下【xià】培【péi】养【yǎng】瓶后加少量培养基终止消【xiāo】化。按6-8ml/瓶补【bǔ】加培【péi】养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液【yè】，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞【bāo】悬液【yè】按1: 2到1: 5的【de】比例分到新的含8ml培养【yǎng】基的新皿【mǐn】中或者瓶中【zhōng】。

 
人肺腺癌细胞(NCI-H1395)对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细【xì】胞，1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃去上清液【yè】，补【bǔ】加l-2mL 培养液后【hòu】吹【chuī】匀，将细胞悬液【yè】按1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半数换【huàn】液【yè】方式，弃去半数培养基后【hòu】，将剩余细胞【bāo】悬起，将 胞【bāo】悬液按1: 2到1: 3的比【bǐ】例分到新的含8ml培养【yǎng】基【jī】的新皿中或者瓶中。

 
细【xì】胞【bāo】冻存：待细胞生长【zhǎng】状态良好时，可进【jìn】行细胞【bāo】冻存。贴壁【bì】细胞冻存时，弃 去培养基【jī】后加入【rù】少量【liàng】胰酶，细胞变圆脱落后，加入【rù】约【yuē】lml含血清【qīng】的培养基后 加入冻【dòng】存管中，再添加【jiā】1〇%DMSO后进行冻存。悬【xuán】浮细胞冻存时【shí】，应将【jiāng】细胞收【shōu】集，1000RPM条件下离心4分钟，少量【liàng】保存上清液（防止【zhǐ】细胞【bāo】吸走)，加 入部分【fèn】新鲜培养【yǎng】基，加【jiā】入到冻存管【guǎn】中，在冻存管中加入【rù】1〇%DMSO后进行冻存。

 
注意事项：
收到细胞后，若【ruò】发现干冰己挥发【fā】干净、冻存管【guǎn】瓶盖脱落、破损及细【xì】胞有污染，请立即【jí】与【yǔ】我们电联【lián】。
所有动物细【xì】胞均视为有【yǒu】潜在的生物危害性，必须在二级生物【wù】安全台内操作【zuò】，并【bìng】请注意【yì】防护【hù】，所有废液及【jí】接触【chù】过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：肺腺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肺腺癌细胞(NCI-H1395)运输和保【bǎo】存：可选【xuǎn】择干冰运输及发送【sòng】复苏存【cún】活【huó】细胞方式：（1)干【gàn】冰【bīng】运【yùn】输，收到后立即转入【rù】液氮冻存或直接【jiē】复苏；（2)存活细胞

，收【shōu】到后应继续生【shēng】长，传【chuán】代达到细【xì】胞生长状态良好时，再进行冻存。具体【tǐ】操【cāo】作见细【xì】胞【bāo】培养步骤。
细胞用途：仅供使用。