人肺腺癌细胞（NCI-H1975）

人肺腺癌细胞(NCI-H1975)
细胞介绍：
这株细胞于1988年七月建株，组织提供者是一位非吸烟人士。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 RPIVM-1640 培养基(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC03 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g八，丙酮【tóng】酸钠O.llg八【bā】)，90%;胎牛血清，10%。

2. 培养【yǎng】条件：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏【shì】度，培养箱湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基【jī】，10%DMSO,现用现配。液氮储存【cún】。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞【bāo】：将含有lmL细胞悬【xuán】液的冻存管在37°C水浴中【zhōng】迅速摇晃解冻，加【jiā】入4mL培养基混合【hé】均匀。在1000RPM条件【jiàn】下离【lí】心4分钟【zhōng】，弃【qì】去上清液，补加【jiā】l-2mL培养基后【hòu】吹匀。然后将所【suǒ】有细胞悬液加入培养瓶中培【péi】养过夜【yè】（或将 细胞悬液加入l〇cm皿中【zhōng】，加入约【yuē】8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。细胞传代：如果细胞密度80%-90%,即可进行传代培养。

 
人肺腺癌细胞(NCI-H1975)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培养上清，用【yòng】不含钙、镁【měi】离子【zǐ】的PBS润洗细胞9-21次。力【lì】口2m丨【shù】消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培养箱中消化【huà】9-21分钟【zhōng】，然后在显【xiǎn】微【wēi】镜下观察细胞消化【huà】情况，若细【xì】胞大部 分变圆【yuán】并【bìng】脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终【zhōng】止消化。按6-8ml/瓶补【bǔ】加培养基，轻轻打匀【yún】后吸出，在1000RPM条【tiáo】件【jiàn】下离心4分钟【zhōng】，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培养液后吹【chuī】匀【yún】。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到新的含【hán】8ml培养基的新【xīn】皿中或者瓶中。

 
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件【jiàn】下离【lí】心4分钟，弃去上【shàng】清液，补加l-2mL 培养液【yè】后吹匀，将细【xì】胞悬【xuán】液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的 新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半数换液方式，弃【qì】去半【bàn】数培养【yǎng】基【jī】后，将剩余细胞悬起，将【jiāng】细 胞悬液【yè】按1: 2到1: 3的比例分到新的含8ml培养【yǎng】基【jī】的新皿中或者瓶中。

细【xì】胞冻【dòng】存：待细胞生【shēng】长状态良【liáng】好时，可进行细胞冻存【cún】。贴壁细胞冻存时，弃去【qù】培养基后加入少量胰酶，细【xì】胞【bāo】变圆脱落后，加入约lml含血清的【de】培养基后加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行【háng】冻存【cún】。悬浮细【xì】胞冻【dòng】存时，应将细胞【bāo】 收集，1000RPM条件下离心【xīn】4分钟，少【shǎo】量保存【cún】上清【qīng】液（防止细胞吸走)，加 入部分新鲜培养基，加入到【dào】冻【dòng】存管中【zhōng】，在冻存管【guǎn】中加入【rù】1〇%DMSO后进行冻【dòng】存。

 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发干【gàn】净、冻【dòng】存管瓶【píng】盖脱【tuō】落、破损及细胞有【yǒu】污染【rǎn】，请【qǐng】立【lì】即与我们电联。
所有动物细【xì】胞均【jun1】视为有潜在的生物【wù】危害【hài】性，必【bì】须【xū】在二级生物安全台内操作，并请注意【yì】防护，所【suǒ】有废液及接【jiē】触过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：器官：肺疾病：腺癌；非小细胞肺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肺腺癌细胞(NCI-H1975)运输【shū】和保存【cún】：可选择干冰运输及发送【sòng】复【fù】苏存活细胞方式：（1)干冰运【yùn】输，收到后立即转入【rù】液氮【dàn】冻存或直【zhí】接【jiē】复苏；（2)存【cún】活细胞，收到后【hòu】应继续生长，传代【dài】达到细胞【bāo】生长【zhǎng】状态良好时【shí】，再进行冻存。具体操【cāo】作见细胞【bāo】培养步骤。

细胞用途：仅供使用。