人肺癌细胞（NCI-H3255）

人肺癌细胞(NCI-H3255)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 RPIVM-1640 培养基(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC031.5g八, D-葡萄【táo】糖2.5g八，丙酮酸钠O.llg八)，90%;胎牛血清，10%。

2. 培养条件：气相：空【kōng】气【qì】，95%;二氧化【huà】碳，5%。温度：37摄【shè】氏度【dù】，培养箱湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基【jī】，10%DMSO,现用现配。液氮【dàn】储存。
 
2)细胞处理： 
复苏细胞：将含【hán】有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅【xùn】速摇晃解冻，加【jiā】入4mL培养基【jī】混【hún】合均匀【yún】。在1000RPM条件下【xià】离【lí】心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加【jiā】入培养瓶中培养过夜【yè】（或将【jiāng】 细胞悬液加入【rù】l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肺癌细胞(NCI-H3255)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去【qù】培养上清，用不含钙【gài】、镁离子的PBS润洗【xǐ】细胞9-21次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中【zhōng】，置【zhì】于37°C培养箱中消【xiāo】化9-21分钟，然后在显微镜下观【guān】察细胞消化情况【kuàng】，若细【xì】胞大部 分变圆并脱落，迅速拿回【huí】操作台，轻敲几【jǐ】下培养瓶后【hòu】加少量培养基终【zhōng】止消化。按【àn】6-8ml/瓶补加【jiā】培【péi】养基，轻轻打匀后吸出，在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃去上【shàng】清【qīng】液【yè】，补加l-2mL培【péi】养液后吹匀。将细胞悬液按1: 2到【dào】1: 5的【de】比例分到【dào】新的含8ml培养基的新【xīn】皿【mǐn】中或【huò】者瓶中【zhōng】。 

细胞冻【dòng】存：待细【xì】胞生长状态良好时，可进【jìn】行细胞冻存。贴【tiē】壁细胞冻存时，弃去【qù】培养基后加【jiā】入少量胰酶，细【xì】胞变圆脱落后【hòu】，加入约【yuē】lml含血清的【de】培养基后【hòu】 加【jiā】入冻存管中，再【zài】添加1〇%DMSO后进行冻存。 

注意事项：
收到细胞后【hòu】，若发现干【gàn】冰己挥发干净、冻存【cún】管瓶盖脱落、破【pò】损及【jí】细胞有污染【rǎn】，请立即与我【wǒ】们电联。
所有【yǒu】动物细胞均视为有潜在的【de】生物【wù】危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意【yì】防【fáng】护【hù】，所有废液及接触过此【cǐ】细【xì】胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃。

细胞特性：
1)来源：肺癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肺癌细胞(NCI-H3255)运输和保存：使用含【hán】有胎牛血清的【de】2ml冻存管发送【sòng】存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常【cháng】温条件下，离【lí】心5min后【hòu】，于洁净【jìng】操【cāo】作【zuò】台弃去上清【qīng】，加入推荐使【shǐ】用的培养【yǎng】基【jī】后转移至l〇cm培养皿或者T25培【péi】养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。细胞用途：仅供使用。