人胃癌细胞（NCI-N87）

人胃癌细胞(NCI-N87)
细胞介绍：
NCI-N87细胞【bāo】表达表【biǎo】面糖蛋白癌胚抗原(CEA)和TAG 72,并且没有【yǒu】左【zuǒ】旋多巴胺脱羧【suō】 酶(DDC)活性。它【tā】们的血管活性的肠肽【tài】(VIP)受【shòu】体活性极低并缺乏胃泌激【jī】素【sù】受体【tǐ】。它【tā】们表达蕈毒碱胆碱受【shòu】体。没有证据表【biǎo】明存在N-myc, L-myc, myb和【hé】EGF受体基因的重组。这个细胞株表达【dá】的c-myc和c-erb-B 2 RNA水平与【yǔ】其【qí】它细胞株相当。以【yǐ】下【xià】基因不表达:N-myc, L-myc, c-cis, IGF-2,或胃泌激素释放肽。据报道NCI-N87细胞的植板率为4.3%。

细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 RPIVM-1640 培养基(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC031.5g八【bā】, D-葡萄糖【táng】2.5g八，丙酮酸钠O.llg八)，90%;胎牛血清，10%。

2. 培【péi】养【yǎng】条件：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度。
3.冻存【cún】液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现用现配【pèi】。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞【bāo】：将含有【yǒu】lmL细胞悬液的冻存管在【zài】37°C水【shuǐ】浴中迅【xùn】速摇晃解【jiě】冻【dòng】，加 入4mL培养基混【hún】合均【jun1】匀【yún】。在1000RPM条件下离心4分钟，弃【qì】去上【shàng】清液，补【bǔ】加l-2mL培养基后吹匀。然【rán】后【hòu】将所有细胞悬液加入培养瓶【píng】中【zhōng】培养【yǎng】过夜（或将 细【xì】胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人胃癌细胞(NCI-N87)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上【shàng】清【qīng】，用【yòng】不含钙、镁离子的【de】PBS润【rùn】洗细胞9-21次。力【lì】口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化【huà】9-21分钟，然后在显微镜【jìng】下观察【chá】细胞消【xiāo】化情况，若细胞大部 分变【biàn】圆并【bìng】脱落，迅速拿回操作台【tái】，轻敲几下【xià】培养瓶后加【jiā】少量培养基终止消化。按【àn】6-8ml/瓶【píng】补加培养基，轻轻打【dǎ】匀【yún】后吸【xī】出，在1000RPM条件下【xià】离心4分 钟【zhōng】，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液【yè】按1: 2到1: 5的比例分到新的含【hán】8ml培【péi】养基的新【xīn】皿中【zhōng】或者中。

 
细胞冻【dòng】存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细【xì】胞冻存时，弃【qì】去【qù】培养基后加【jiā】入少量【liàng】胰酶，细胞变圆【yuán】脱落后，加入【rù】约lml含血清的培养基后 加入【rù】冻存管中，再添【tiān】加【jiā】1〇%DMSO后进行冻存。

 
注意事项：
收到细胞【bāo】后，若发现干【gàn】冰己挥发干净【jìng】、冻存管【guǎn】瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请【qǐng】立即与我们【men】电【diàn】联。
所有动物细胞【bāo】均视为有潜在的【de】生【shēng】物危害性，必【bì】须在二【èr】级生物安全【quán】台内【nèi】操作，并【bìng】请注意防护，所有废【fèi】液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：胃癌，肝转移
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人胃癌细胞(NCI-N87)运输【shū】和保存：使用【yòng】含有胎牛血清的2ml冻存管发送【sòng】存活细胞【bāo】。收到细胞后，可在1000RPM，常温【wēn】条件【jiàn】下【xià】，离心5min后，于【yú】洁净操作台【tái】弃去上清，加入推【tuī】荐使用的【de】培【péi】养基后转移至l〇cm培养皿或者T25培养瓶中【zhōng】培【péi】养，传【chuán】代达到细胞生长状态【tài】良【liáng】好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。