人膀胱移行细胞rutou瘤细胞（RT4）

人膀胱移行细胞rutou瘤细胞(RT4)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 McCOY's 5A 培养基【jī】(McCOY's 5A，SIGMA,添加 NaHC03 2.2g/L)，90%;胎牛血清【qīng】，10%。
2.培养条件：气相：空【kōng】气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏【shì】度，培养箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配。液【yè】氮储【chǔ】存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在【zài】37°C水浴中迅【xùn】速摇晃解冻，加入4mL培养基【jī】混【hún】合均匀。在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培养【yǎng】基后吹【chuī】匀。然后【hòu】将所有细【xì】胞悬液加入培【péi】养瓶【píng】中培养过【guò】夜（或将细胞悬【xuán】液加入l〇cm皿中【zhōng】，加【jiā】入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度【dù】。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人膀胱移行细胞rutou瘤细胞(RT4)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次【cì】。力口2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于【yú】37°C培养【yǎng】箱中消化9-21分钟【zhōng】，然后【hòu】在显微镜下观【guān】察细胞【bāo】消化【huà】情况，若细胞大部【bù】分变【biàn】圆并脱落，迅【xùn】速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后【hòu】加【jiā】少量培养基终【zhōng】止消化。按6-8ml/瓶补加培【péi】养基，轻轻打【dǎ】匀后吸出【chū】，在1000RPM条件下离心4分【fèn】钟，弃去上【shàng】清液，补加l-2mL培养液后【hòu】吹匀。将细胞悬液按1: 2到【dào】1: 5的【de】比例【lì】分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
 
3)细胞冻存：待细胞生长状【zhuàng】态良【liáng】好时【shí】，可进行细【xì】胞冻存。贴【tiē】壁细胞冻存时，弃去【qù】培养基后加入少【shǎo】量胰酶，细胞变圆【yuán】脱落后，加入【rù】约lml含血【xuè】清【qīng】的【de】培养基后加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后【hòu】进行冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发【fā】现干冰己挥发干净【jìng】、冻【dòng】存管瓶盖【gài】脱落、破【pò】损及细胞有【yǒu】污【wū】染，请立即与我们电【diàn】联。
所有动物细胞均视为有潜【qián】在的【de】生物危害性【xìng】，必须在二级【jí】生物安【ān】全台内【nèi】操作【zuò】，并请注意防护，所有废液及接触过【guò】此【cǐ】细胞【bāo】的器皿需要灭菌后【hòu】方能【néng】丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：膀胱移行细胞rutou瘤
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人膀胱移行细胞rutou瘤细胞(RT4)运输和保存：使用【yòng】含有胎牛【niú】血清的2ml冻【dòng】存管发送存活细胞。收到细胞后，可【kě】在【zài】1000RPM，常【cháng】温条件【jiàn】下，离心【xīn】5min后，于洁净操作台弃去上清，加【jiā】入推荐使【shǐ】用的培养基【jī】后转移至l〇cm培养皿或者T25培【péi】养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良【liáng】好时【shí】，再进行冻存。具体【tǐ】操【cāo】作见细【xì】胞【bāo】培养【yǎng】步骤。
细胞用途：仅供使用。