原发性骨肉瘤细胞（SJSA-1）

原发性骨肉瘤细胞(SJSA-1)
细胞介绍：
SJSA-1细胞【bāo】（原来称为OsA-CL)建系于1982年，源于一个诊断【duàn】为原【yuán】发性股【gǔ】骨【gǔ】骨肉瘤疾【jí】病病人体内的肿瘤【liú】。该细胞含【hán】有编码p53相关蛋【dàn】白的【de】基因。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备DMEM培养【yǎng】基(GIBC0)，90%;胎牛血清，10%; PS，1%。
2.培养【yǎng】条件：气相：空【kōng】气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温度：37摄【shè】氏度，培【péi】养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基【jī】，10%DMSO,现用现配。液【yè】氮【dàn】储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含有lmL细【xì】胞悬液【yè】的冻【dòng】存管【guǎn】在37°C水浴中迅速摇晃解冻【dòng】，加入4mL培养基混【hún】合【hé】均匀【yún】。在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基【jī】后【hòu】吹匀。然后将所有【yǒu】细胞悬液加【jiā】入培养瓶中培养过夜（或【huò】将细胞悬液加入l〇cm皿【mǐn】中，加入约8ml培养基，培养过【guò】夜）。第二天换【huàn】液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
原发性骨肉瘤细胞(SJSA-1)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上清，用不含钙、镁离【lí】子【zǐ】的PBS润洗【xǐ】细【xì】胞9-21次。力口2m丨【shù】消化【huà】液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-21分钟，然【rán】后在显微镜下【xià】观【guān】察细胞消【xiāo】化【huà】情况，若细【xì】胞大部分【fèn】变圆并脱落【luò】，迅速拿【ná】回操作台，轻敲几下培【péi】养瓶后加少量【liàng】培【péi】养基终止消【xiāo】化。按6-8ml/瓶补加培养基【jī】，轻轻打匀后吸出【chū】，在1000RPM条件【jiàn】下离【lí】心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀【yún】。将细胞悬液【yè】按【àn】1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培【péi】养基的新【xīn】皿中或【huò】者 瓶中。
细胞冻存：待细胞生【shēng】长状态良好时，可进行细【xì】胞冻【dòng】存。贴【tiē】壁细胞冻存时【shí】，弃去培养基后加入【rù】少量胰酶【méi】，细胞变圆脱落【luò】后，加【jiā】入约【yuē】lml含血清的【de】培养基【jī】后加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻【dòng】存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发【fā】现干【gàn】冰己挥发干【gàn】净、冻【dòng】存【cún】管瓶盖脱落、破【pò】损及细胞【bāo】有污染，请立即与我们电联。
所有【yǒu】动物细胞【bāo】均视为有【yǒu】潜在的生物【wù】危害【hài】性，必须【xū】在二【èr】级生物安全台内操作，并【bìng】请注意防护，所有废液及接触过此细【xì】胞的器皿需要灭菌【jun1】后方能【néng】丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：原发性股骨骨肉瘤
2)形态：成纤维细胞，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
原发性骨肉瘤细胞(SJSA-1)运输和保存【cún】：使用含有胎牛血【xuè】清【qīng】的2ml冻存管发送【sòng】存活细胞。收到【dào】细胞后，可在1000RPM，常温【wēn】条【tiáo】件下，离心5min后【hòu】，于洁净【jìng】操作台弃去上清，加入推荐使用【yòng】的培养基后转移至l〇cm培养【yǎng】皿或【huò】者T25培养【yǎng】瓶中培养【yǎng】，传代达到细胞生【shēng】长状态【tài】良好时【shí】，再进【jìn】行冻存。具体操【cāo】作见细胞培【péi】养步骤。
细胞用途：仅供使用。