人皮肤黑色素瘤细胞（SK-MEL-1）

人皮肤黑色素瘤细胞(SK-MEL-1)
细胞介绍：
该【gāi】细【xì】胞【bāo】由Oettgen F及其【qí】同事从一名29岁的患【huàn】有广泛、快速进展性恶性黑色素【sù】瘤【liú】 的【de】白人【rén】男【nán】性患者的【de】胸导管中分离建立的。该细胞可产生黑【hēi】色【sè】素，电镜检测发现细胞中色素颗粒与【yǔ】自身合成和【hé】吞【tūn】噬作用相关。在63%的恶性黑色素瘤患者和10%其他疾【jí】病患者体内发现了针对该细胞系的抗体【tǐ】。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 MEM-EBSS 培养基(Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle ’ s Balanced Salts) (MEM-EBSS))( MEM，GIBCO,添加【jiā】 EBSS)，90%;
胎牛血清，10%
2.培养条件：气相【xiàng】：空【kōng】气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37摄氏度【dù】，培养箱湿【shī】度为95%。
3.冻存【cún】液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配。液氮储存【cún】。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬【xuán】液的【de】冻存管在37°C水【shuǐ】浴中迅速摇晃解冻【dòng】，加【jiā】入【rù】4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清【qīng】液【yè】，补加l-2mL培养基后【hòu】吹匀【yún】。然后将所有细胞悬液加入【rù】培养【yǎng】瓶【píng】中培养【yǎng】过夜（或【huò】将 细【xì】胞悬【xuán】液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养【yǎng】基【jī】，培养过【guò】夜）。第二天换液并检查细胞【bāo】密度。
 
人皮肤黑色素瘤细胞(SK-MEL-1)细胞传代：
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方【fāng】法一：收集【jí】细胞，1000RPM条件下【xià】离【lí】心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养【yǎng】液后吹匀，将细【xì】胞悬液按1: 2到1: 5的【de】比例分到【dào】新的【de】含8ml培【péi】养基的新皿中【zhōng】或者瓶中。
方法二：可选【xuǎn】择【zé】半【bàn】数换液方式，弃去半数培养基【jī】后，将剩余细胞悬起，将【jiāng】细胞悬液【yè】按1: 2到1: 3的比例分到新【xīn】的含8ml培【péi】养基的新皿中或【huò】者瓶中。
细胞冻存：待细【xì】胞生【shēng】长状态【tài】良【liáng】好时，可【kě】进行【háng】细胞冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞【bāo】收集，1000RPM条件下离心4分钟，少【shǎo】量保存上清液（防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存【cún】管【guǎn】中，在冻存管【guǎn】中加入10%DMSO 后进【jìn】行冻【dòng】存。
 
注意事项：
收到细胞后【hòu】，若【ruò】发现【xiàn】干冰己挥发干净【jìng】、冻存管瓶盖脱【tuō】落、破损及细胞有污染，请立【lì】即【jí】与我们电联。
所有动物细胞【bāo】均视【shì】为有潜在的生物危害【hài】性，必须在二级【jí】生物安全台内操【cāo】作，并请【qǐng】注意防护，所有废液【yè】及接触过【guò】此【cǐ】细胞的【de】器皿需要灭菌后方能【néng】丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：皮肤黑色素瘤
2)形态：球形，悬浮生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人皮肤黑色素瘤细胞(SK-MEL-1)运输和保存：可【kě】选择干冰运输及发送复【fù】苏【sū】存活细【xì】胞方式【shì】：（1)干冰运输，收到后立即转【zhuǎn】入【rù】液氮冻存或直【zhí】接复苏；（2)存活细胞，收【shōu】到后应继续生长【zhǎng】，传代达到【dào】细胞生【shēng】长【zhǎng】状态良好时【shí】，再进行冻存。具体操【cāo】作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。