人卵巢癌细胞 （SK-0V-3）

人卵巢癌细胞 (SK-0V-3)
细胞介绍：
SK-0V-3由G.Trempe和【hé】LJ.OId在1973年从卵巢肿【zhǒng】瘤病【bìng】人【rén】的腹水分【fèn】离得到。此细胞对肿瘤坏死【sǐ】因【yīn】子和几【jǐ】种细胞毒性【xìng】药物包括白喉毒素、顺钼和阿霉素【sù】均耐受【shòu】。在裸鼠中致瘤，且形成与卵巢原位癌【ái】*的中【zhōng】度分化的腺癌【ái】。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备McCoy's 5A培养基，90%;北美【měi】胎【tāi】牛血清，10%;双【shuāng】抗1%。
2.培养条件：气相：空气，95%;二【èr】氧【yǎng】化碳，5%。温【wēn】度：37摄【shè】氏度，培【péi】养箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
1.复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴【yù】中迅【xùn】速摇晃解冻，加【jiā】入4mL培养基混合均匀【yún】。在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟【zhōng】，弃去上【shàng】清液，补加l-2mL培养【yǎng】基后吹匀【yún】。然【rán】后将所有细胞【bāo】悬液加入【rù】培养瓶中培【péi】养过夜【yè】（或将细胞悬液加入【rù】l〇cm皿【mǐn】中【zhōng】，加入约8ml培养【yǎng】基，培养【yǎng】过夜）。第二天换【huàn】液【yè】并检查细胞【bāo】密度。
2.细【xì】胞传代：如【rú】果细胞密度达80%-90%，即可【kě】进【jìn】行传代培养。
 
人卵巢癌细胞 (SK-0V-3)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上清，用不含钙、镁离【lí】子的PBS润洗细胞9-21次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置于37°C培养箱【xiāng】中消化9-21分钟【zhōng】，然后在显【xiǎn】微【wēi】镜下观察细胞消【xiāo】化【huà】情况，若【ruò】细胞大部 分变圆并脱落，迅速【sù】拿回操作台，轻【qīng】敲几下培【péi】养瓶后加少量培【péi】养基终止消化。按6-8ml/瓶补【bǔ】加培养基【jī】，轻轻【qīng】打匀【yún】后吸出，在1000RPM条【tiáo】件下【xià】离【lí】心4分钟，弃去【qù】上清液，补加【jiā】l-2mL培养液【yè】后吹匀。将细胞悬【xuán】液【yè】按1: 2到1: 5的比例分到新的【de】含8ml培养基的【de】新皿中或【huò】者 瓶中。
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞冻存时【shí】，弃【qì】去培【péi】养基后，PBS清洗瓶底【dǐ】9-21次后【hòu】加【jiā】入lml胰酶，细胞变圆脱【tuō】落后【hòu】，加入2ml*培养基终止消化，可使用【yòng】血球计数板计数。1000RPM离【lí】心【xīn】5分钟【zhōng】去【qù】掉上清。用血【xuè】清重悬浮，加【jiā】DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅速混【hún】匀，按每lml的数量分配到冻存【cún】管中【zhōng】，注意【yì】冻存 管做好标识。本公司按每【měi】个【gè】冻存管【guǎn】细【xì】胞数目大于【yú】1X106个细胞冻存。
将冻存管置于程序【xù】降温盒【hé】中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转【zhuǎn】入【rù】液 氮【dàn】灌储存。记【jì】录【lù】冻存管位置以【yǐ】便下次拿取。
 
注意事项：
收到【dào】细胞后，若【ruò】发【fā】现干【gàn】冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有【yǒu】污染，请立即与我们电【diàn】联。
所有动物细胞均视为有潜在【zài】的生物危【wēi】害性，必须【xū】在二级【jí】生物安全台内【nèi】操作，并请注意防护，所有【yǒu】废液及【jí】接触过此细胞的器皿需【xū】要【yào】灭菌【jun1】后【hòu】方能丢【diū】弃。
 
细胞特性：
1)来源：卵巢腺癌，腹水转移
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人卵巢癌细胞 (SK-0V-3)运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：
（1)干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；
（2)存【cún】活细胞，收到后应继续生【shēng】长，传代达到细【xì】胞生长【zhǎng】状态良好时，再进【jìn】行冻【dòng】存【cún】。
具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。