人肝癌细胞（SMMC-7721）

人肝癌细胞(SMMC-7721)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 DMEM-H 培【péi】养【yǎng】基【jī】(DMEM-H，GIBCO,添加 NaHC031.5g/L)， 90%;胎牛【niú】血【xuè】清，10%。（DMEM液体【tǐ】培养基：GIBCO，11995-065)。
2.培养条件：气【qì】相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄【shè】氏度，培养【yǎng】箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用【yòng】现配。液氮储【chǔ】存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将【jiāng】含有lmL细【xì】胞悬【xuán】液的【de】冻【dòng】存管在【zài】37°C水浴【yù】中迅速摇【yáo】晃【huǎng】解冻，加入【rù】4mL培养基混合均匀【yún】。在1000RPM条件下离心【xīn】4分【fèn】钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后【hòu】吹匀。然后将所有细胞悬液加入培【péi】养【yǎng】瓶中培【péi】养过夜（或将细【xì】胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天【tiān】换【huàn】液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肝癌细胞(SMMC-7721)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培【péi】养上清，用不含钙、镁【měi】离【lí】子的PBS润洗细胞9-21次。力口【kǒu】2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置于37°C培【péi】养箱中消化9-21分【fèn】钟【zhōng】，然【rán】后在显微镜下观察细胞【bāo】消化情【qíng】况，若细胞【bāo】大部分【fèn】变圆并脱落【luò】，迅【xùn】速拿【ná】回操作台，轻【qīng】敲几下培养瓶后加【jiā】少量培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀【yún】后吸【xī】出，在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去【qù】上清液【yè】，补加【jiā】l-2mL培【péi】养液后吹匀。将【jiāng】细胞悬【xuán】液按【àn】1: 2到【dào】1: 5的比例分【fèn】到新的含8ml培【péi】养基的新皿中或【huò】者瓶中。
 
细胞冻存【cún】：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃【qì】去培养基后【hòu】加【jiā】入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约lml含血清【qīng】的【de】培养基后【hòu】加【jiā】入冻存【cún】管【guǎn】中，再【zài】添加1〇%DMSO后【hòu】进行冻【dòng】存【cún】。
 
注意事项：
收到细胞后【hòu】，若【ruò】发现干冰己【jǐ】挥发干【gàn】净、冻存管瓶盖脱落、破损及【jí】细胞有污染，请立即【jí】与我们电联【lián】。
所有【yǒu】动物细胞均视【shì】为【wéi】有潜在的生物危害性，必须在二【èr】级生物【wù】安全台内操作，并请注意防护，所有【yǒu】废液及【jí】接触过此细【xì】胞【bāo】的【de】器皿需要灭菌后方能【néng】丢【diū】弃。
 
细胞特性：
1)来源：肝癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肝癌细胞(SMMC-7721)运【yùn】输和保存：使用【yòng】含有胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞【bāo】。收到细【xì】胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后【hòu】，于洁净操作台弃去【qù】上清【qīng】，加入推荐使用的培【péi】养基后转移【yí】至l〇cm培【péi】养皿【mǐn】或者T25培养瓶中培养，传代达到细胞生【shēng】长【zhǎng】状【zhuàng】态良好时【shí】，再【zài】进行冻【dòng】存。具体【tǐ】操作见【jiàn】细胞培养步骤【zhòu】。
细胞用途：仅供使用。