人肝癌细胞（SNU387）

人肝癌细胞(SNU387)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培【péi】养基【jī】(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC031.5g八, D-葡萄糖【táng】2.5g八【bā】，丙酮【tóng】酸钠O.llg八)，90%;胎牛【niú】血清【qīng】，10%。
2.培【péi】养【yǎng】条件：气相：空【kōng】气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度【dù】，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻【dòng】存液：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用现配。液【yè】氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含有【yǒu】lmL细胞悬液【yè】的冻【dòng】存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻【dòng】，加【jiā】入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条【tiáo】件下【xià】离心4分【fèn】钟，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培【péi】养基后吹匀。然后【hòu】将所【suǒ】有细胞【bāo】悬液【yè】加入培养瓶【píng】中培养过夜【yè】（或将 细胞悬【xuán】液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养【yǎng】基，培养过【guò】夜【yè】）。第二天【tiān】换液并检查【chá】细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肝癌细胞(SNU387)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清【qīng】，用【yòng】不含【hán】钙、镁离子的PBS润洗细【xì】胞9-21次。力口2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置【zhì】于37°C培养【yǎng】箱中消化【huà】9-21分钟，然【rán】后【hòu】在显微镜下观察【chá】细胞消化情况【kuàng】，若细胞大部分变圆并脱落，迅速【sù】拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基【jī】终止消化。按6-8ml/瓶补加培养基【jī】，轻轻打【dǎ】匀后吸出，在1000RPM条【tiáo】件下离【lí】心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养【yǎng】液后吹匀。将细胞悬液【yè】按【àn】1: 2到1: 5的比例【lì】分到新的含【hán】8ml培【péi】养基的新皿中【zhōng】或者瓶中。
 
3)细胞【bāo】冻存【cún】：待细胞生长状态良好时，可【kě】进行细胞【bāo】冻【dòng】存。贴壁细胞冻存【cún】时，弃去【qù】培【péi】养基后加【jiā】入少量【liàng】胰酶，细胞【bāo】变圆脱落后【hòu】，加入约lml含血清的培养基后加入【rù】冻存管中，再【zài】添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收到【dào】细胞后，若发现干冰【bīng】己挥发干净、冻存管瓶盖脱落【luò】、破【pò】损【sǔn】及细胞【bāo】有污染，请立即与【yǔ】我们电【diàn】联。
所有动物【wù】细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级【jí】生物安【ān】全台【tái】内【nèi】操作【zuò】，并请注意防护，所有【yǒu】废液及接触过此【cǐ】细胞【bāo】的器皿需要【yào】灭菌后方能【néng】丢【diū】弃。
 
细胞特性：
1)来源：肝癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肝癌细胞(SNU387)运【yùn】输和【hé】保【bǎo】存：使用含有【yǒu】胎牛血清的2ml冻存【cún】管【guǎn】发送存活细胞。收到【dào】细胞后，可【kě】在1000RPM，常【cháng】温【wēn】条【tiáo】件下，离心5min后，于洁【jié】净操作台弃【qì】去上清，加入推荐【jiàn】使用的培养基后转移【yí】至l〇cm培养皿或【huò】者T75培养【yǎng】瓶【píng】中培养，传代达到细胞生长 状态良好时，再进行冻【dòng】存。具体操作【zuò】见细胞培【péi】养步骤。
细胞用途：仅供使用。