人肝癌细胞（SNU449）

人肝癌细胞(SNU449)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养【yǎng】基(RPMI-1640:GIBC)，90%;胎牛血清，10%。
2.培养条【tiáo】件【jiàn】：气相：空气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度【dù】为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用【yòng】现配。液氮【dàn】储【chǔ】存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含有lmL细胞悬液【yè】的冻存管在【zài】37°C水浴中迅速摇【yáo】晃【huǎng】解冻，加入4mL培【péi】养【yǎng】基【jī】混合均匀。在【zài】1000RPM条件下离心4分【fèn】钟【zhōng】，弃【qì】去上清液【yè】，补加l-2mL培养基后吹匀。然【rán】后将所有细胞悬液加入培【péi】养瓶中培养过【guò】夜（或将【jiāng】细【xì】胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养【yǎng】基【jī】，培【péi】养过夜）。第二天换液并检查细胞密【mì】度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肝癌细胞(SNU449)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上清，用不含钙【gài】、镁离子的PBS润洗细胞9-21次【cì】。力口2m丨消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置于【yú】37°C培养箱中消【xiāo】化9-21分钟，然【rán】后在【zài】显微镜下观察细胞【bāo】消化情况，若细胞【bāo】大【dà】部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲【qiāo】几下培养【yǎng】瓶后加少【shǎo】量培养基终止消化。按6-8ml/瓶【píng】补【bǔ】加培养基，轻轻打匀【yún】后吸出，在1000RPM条件【jiàn】下【xià】离心4分钟，弃去上【shàng】清液，补【bǔ】加l-2mL培【péi】养液后吹匀。将细胞悬【xuán】液按1: 2到1: 5的比例【lì】分到【dào】新的含8ml培养基【jī】的【de】新【xīn】皿中或者瓶中。
  
3)细【xì】胞冻存：待【dài】细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存【cún】。贴壁细胞冻存【cún】时，弃【qì】去【qù】培【péi】养基【jī】后【hòu】加入少量胰【yí】酶，细胞变圆脱【tuō】落【luò】后，加入约lml含血清的培【péi】养基后加入冻【dòng】存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收到细胞后【hòu】，若发现干冰己挥【huī】发干净、冻存管瓶【píng】盖脱落【luò】、破损【sǔn】及细胞有【yǒu】污【wū】染，请立即与我们电联。
所有动【dòng】物【wù】细胞均视为有潜在的生物【wù】危害性，必须在二级生【shēng】物安全台内操【cāo】作，并请注意防护，所有废液及接【jiē】触【chù】过【guò】此细胞的【de】器皿【mǐn】需要【yào】灭菌后方【fāng】能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：肝癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肝癌细胞(SNU449)运输和保【bǎo】存：使用含有胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞【bāo】。收到细胞【bāo】后，可在【zài】1000RPM，常温条件下，离心5min后【hòu】，于【yú】洁净操【cāo】作台弃去【qù】上清，加入推【tuī】荐使用的培养基后【hòu】转移至l〇cm培养皿或者T75培养瓶中培养【yǎng】，传代【dài】达到细【xì】胞【bāo】生长状态【tài】良好时，再【zài】进行冻存。具体操作【zuò】见【jiàn】细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。