人肺腺癌细胞（SPC-A-1）

人肺腺癌细胞(SPC-A-1)
细胞介绍：
该细胞源自一位男性肺腺癌患者。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 RPIVM-1640 培养基(RPIVM-1640:GIBCO,添加【jiā】 NaHC03 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g八，丙酮酸钠【nà】O.llg八)，90%;胎牛血清，10%。
2.培养条件：气【qì】相：空气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度【dù】：37摄氏度，培养箱湿度【dù】为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养【yǎng】基【jī】，10%DMSO,现用现配。液氮【dàn】储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含有lmL细胞【bāo】悬液【yè】的【de】冻存管【guǎn】在【zài】37°C水浴中迅【xùn】速摇晃解【jiě】冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培【péi】养基后吹匀。然【rán】后将所有细胞【bāo】悬【xuán】液【yè】加入【rù】培养瓶中培养过夜（或将【jiāng】细胞悬液【yè】加【jiā】入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养【yǎng】过夜【yè】）。第二天换液并检查【chá】细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肺腺癌细胞(SPC-A-1)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的【de】PBS润洗细【xì】胞9-21次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置【zhì】于37°C培养箱中消化9-21分钟，然【rán】后【hòu】在显微镜下观察【chá】细胞消【xiāo】化情况【kuàng】，若细【xì】胞【bāo】大部分变【biàn】圆并脱落，迅速拿回操作台，轻【qīng】敲几下培养瓶后加少【shǎo】量培【péi】养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培养基【jī】，轻轻打匀【yún】后吸出，在1000RPM条【tiáo】件下离【lí】心【xīn】4分【fèn】钟【zhōng】，弃去【qù】上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。将【jiāng】细胞【bāo】悬液按【àn】1: 2到【dào】1: 5的【de】比例分【fèn】到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
 
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分【fèn】钟，弃去上清【qīng】液，补加【jiā】l-2mL 培养液【yè】后吹匀，将细【xì】胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的比例【lì】分到新的含8ml培养基【jī】的新【xīn】皿中或者瓶中。
方【fāng】法二：可选择【zé】半数换液方【fāng】式，弃去半数培养基后【hòu】，将剩余细胞悬【xuán】起，将细 胞【bāo】悬液【yè】按1: 2到1: 3的比例分到新【xīn】的含8ml培养【yǎng】基的【de】新皿中或者瓶中。
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃 去培养基后加入少量胰【yí】酶，细胞【bāo】变【biàn】圆【yuán】脱【tuō】落后，加【jiā】入【rù】约【yuē】lml含血清的【de】培养【yǎng】基后 加入【rù】冻存管中【zhōng】，再添加1〇%DMSO后【hòu】进行冻【dòng】存。悬浮细胞冻存时，应将细胞【bāo】收集，1000RPM条件【jiàn】下离心【xīn】4分钟，少【shǎo】量保存上清液（防止细胞吸走)，加入【rù】部【bù】分新鲜培养基【jī】，加入到冻【dòng】存管【guǎn】中，在冻存管中【zhōng】加【jiā】入1〇%DMSO后【hòu】进行冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发【fā】现【xiàn】干冰【bīng】己挥发干净、冻【dòng】存【cún】管瓶盖脱落、破损及细【xì】胞有污染，请【qǐng】立即与我【wǒ】们电联。
所有动物细胞【bāo】均视为有潜【qián】在的生物危害性，必【bì】须【xū】在【zài】二级生物安全台内操作，并请注意防护，所【suǒ】有废液及接触过此【cǐ】细胞【bāo】的器皿需要【yào】灭菌后方【fāng】能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：肺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肺腺癌细胞(SPC-A-1)运【yùn】输和保存：可选【xuǎn】择干冰【bīng】运输及【jí】发送复苏【sū】存活细胞【bāo】方式：（1)干冰运【yùn】输【shū】，收【shōu】到后【hòu】立即转入液氮冻存或直接复苏；（2)存活【huó】细胞，收到后应【yīng】继续生长，传代达到细胞生长【zhǎng】状【zhuàng】态良好时，再进行冻存。具体操作见细【xì】胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。