大鼠肝细胞（BRL 3A）

大鼠肝细胞(BRL 3A)
细胞介绍
这个细胞【bāo】株【zhū】的【de】无血清条件【jiàn】培养基是MSA的【de】一个来源。MSA多肽【tài】家族能够部分满
足鸡胚成纤维细胞对血清的需求。
 
细胞特性
1)来源：小鼠肝
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
大鼠肝细胞(BRL 3A)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微【wēi】镜【jìng】下确认细【xì】胞生长状态，去【qù】掉封口膜并将T25瓶置于【yú】37°C培养约【yuē】2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如【rú】果细胞【bāo】长满（90%以上）请及【jí】时进【jìn】行细【xì】胞传代，传代【dài】培养用6ml本公【gōng】司附带的*培养基。
5.接到细胞【bāo】次日，请【qǐng】检【jiǎn】查细胞是否污染，若发现污染【rǎn】或疑似污【wū】染，请【qǐng】及时与【yǔ】我们取得电联。
细胞用途：仅供使用。
 
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 DMEM 培养基(DMEM，GIBCO)，90%;胎【tāi】牛血清，10%。
2. 培养条【tiáo】件：气相：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度：37°C，培养【yǎng】箱湿【shī】度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含【hán】有lmL细胞悬液的冻【dòng】存管【guǎn】迅速放入37°C水【shuǐ】浴中（水面要低于冻【dòng】存【cún】管盖部）摇【yáo】晃解冻，移入事先准备好的含有【yǒu】4mL培养基的15ml离心管中混【hún】合【hé】均匀。在1000RPM条件【jiàn】下离心【xīn】4分钟，弃去上【shàng】清液，加入lmL培养基后【hòu】吹【chuī】匀【yún】。然【rán】后【hòu】将所有细胞【bāo】悬液移入含【hán】有5ml培养基【jī】的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查【chá】细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培【péi】养【yǎng】上【shàng】清【qīng】，用不含钙【gài】、镁离子的PBS润洗细【xì】胞9-21次。力口 2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于【yú】37°C培养【yǎng】箱【xiāng】中消【xiāo】化【huà】9-21分【fèn】钟【zhōng】，然后在显微【wēi】镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆【yuán】并脱落，迅【xùn】速拿回【huí】操作台，轻敲几下【xià】培【péi】养瓶后加入【rù】3ml此细胞的培养【yǎng】基终止消【xiāo】化。轻轻吹打后吸出，移入15ml离【lí】心管中，在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃去上清液，加入lmL培养液后吹匀。移入到事先准备好的【de】含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养【yǎng】瓶中培养。
细胞冻存【cún】：待细【xì】胞生长状态良好【hǎo】时，可进行【háng】细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要【yào】消化处【chù】理【lǐ】并进【jìn】行细胞【bāo】计数。消化方【fāng】法按照细胞传代【dài】方【fāng】法的9-21步骤进行，后【hòu】的重悬【xuán】液使用【yòng】血清。悬浮细胞直【zhí】接计数【shù】后离心【xīn】，用血清重悬浮，加DMSO至终【zhōng】浓度【dù】为10%。加入【rù】DMSO后迅速混匀，按每lml的数【shù】量分配到冻存管中。本公【gōng】司按每个冻存管【guǎn】细胞数目大于1X106个细胞冻存。
 
大鼠肝细胞(BRL 3A)注意事项：
收到【dào】细胞后，若发现【xiàn】干冰【bīng】己挥【huī】发干净、冻存管瓶盖【gài】脱落、破损及【jí】细胞有【yǒu】污【wū】染，请立即【jí】与我们【men】电联。所【suǒ】有动【dòng】物细胞均视【shì】为有潜在的生物危害性，必【bì】须在二级【jí】生物安全台内操作，并请注意防护，所【suǒ】有废液及接【jiē】触过此细胞的【de】器皿需要灭菌后方能丢弃【qì】。