小鼠软骨祖细胞 （ATDC5）

小鼠软骨祖细胞 (ATDC5)
细胞介绍
ATDC5细【xì】胞是来源于畸【jī】胎瘤细胞的【de】小鼠软【ruǎn】骨发生细胞系【xì】，在胰【yí】岛素刺【cì】激下，分化【huà】成【chéng】软骨细胞，形成软骨小结，表达II型【xíng】胶原和X型胶原后【hòu】发生矿化，反映软骨【gǔ】发生过【guò】程。
 
细胞特性
1)来源：小鼠软骨
2)形态：多角形，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装运输和【hé】保存：使用T25瓶充液发送活【huó】细胞。收到细胞后，请先在【zài】显微镜下检查细胞生长状态，并【bìng】将T25瓶置【zhì】于培养箱【xiāng】约6h或【huò】过夜后，再次检查细胞【bāo】状态。若【ruò】状态良【liáng】好，可按照【zhào】以【yǐ】下【xià】细胞培【péi】养步骤进行细【xì】胞后续【xù】处理操作。若发现【xiàn】可【kě】疑【yí】污【wū】染物，请及时与我们取得电联。
 
小鼠软骨祖细胞 (ATDC5)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 DMEM 培养基(DMEM，GIBCO)，90%;胎牛【niú】血清【qīng】，10%。
2.培【péi】养条件：气相：空气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度，培养【yǎng】箱湿度【dù】为70%-80%。
3.冻存【cún】液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现用现配。液【yè】氮储存【cún】。
2)细胞处理：复苏细胞：将含有lmL细【xì】胞悬液的冻存管在37°C水浴中【zhōng】迅速摇【yáo】晃解冻，加入【rù】4mL培养基混合均匀。在1000RPM条【tiáo】件下离心4分【fèn】钟【zhōng】，弃去上清【qīng】液【yè】，补加l-2mL培【péi】养基后吹匀【yún】。然后【hòu】将所有【yǒu】细胞悬液【yè】加入培养瓶中【zhōng】培【péi】养过夜【yè】（或将细胞悬液加【jiā】入l〇cm皿中，加【jiā】入约8ml培养基【jī】，培养过夜）。第二天换液并检查细【xì】胞密度。细【xì】胞传代：如果细胞【bāo】密度达【dá】80%-90%，即可【kě】进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用【yòng】不含钙、镁离子的PBS润洗【xǐ】细胞9-22次。 力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶【píng】中，置【zhì】于37°C培【péi】养箱【xiāng】中消化9-22分钟，然后在显【xiǎn】微镜下观察细胞消化情【qíng】况，若【ruò】细胞【bāo】大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台【tái】，轻敲几下培养瓶【píng】后加少量【liàng】培【péi】养基终止消化。按【àn】6-8ml/瓶【píng】补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分 钟，弃去上清【qīng】液，补【bǔ】加l-2mL培养液【yè】后吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的【de】比例分【fèn】到新【xīn】的含8ml培养基的【de】新【xīn】皿中【zhōng】或者瓶中。
细胞冻存：待细胞生长【zhǎng】状态良好时，可进行细胞冻存【cún】。贴壁细胞冻存时，弃【qì】去【qù】培养【yǎng】基【jī】后加【jiā】入少量胰酶，细胞变圆脱【tuō】落后，加入【rù】约lml含血【xuè】清【qīng】的培养基后【hòu】加入冻存【cún】管中，再添加1〇%DMSO后进【jìn】行冻【dòng】存【cún】。
 
小鼠软骨祖细胞 (ATDC5)注意事项：
收到细胞【bāo】后，若发现干冰【bīng】己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及【jí】细胞有污【wū】染，请立即【jí】与我们【men】电联【lián】。
所有动物细胞均视为【wéi】有潜在【zài】的生物危害性【xìng】，必须在二级生【shēng】物【wù】安【ān】全【quán】台内操作，并请【qǐng】注意防护，所【suǒ】有废液及接触过【guò】此【cǐ】细胞的【de】器皿需要灭菌后方能丢弃。