小鼠黑色素瘤细胞（B16）

小鼠黑色素瘤细胞(B16)
细胞特性
1)来源：小鼠黑色素瘤
2)形态：成纤维细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和【hé】保存【cún】：使用T25瓶充液【yè】发【fā】送活细胞。收【shōu】到细【xì】胞后，请先在显【xiǎn】微镜下检查细胞生长状【zhuàng】态【tài】，并将【jiāng】T25瓶置于培养【yǎng】箱约6h或过夜后【hòu】，再次检查细胞状态。若【ruò】状态良好，可按照【zhào】以下细胞培【péi】养步【bù】骤进行细胞后续处理【lǐ】操作。若发现可疑污染【rǎn】物，请及时与【yǔ】我们取得电联。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠黑色素瘤细胞(B16)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备RPIVM-1640培养【yǎng】基(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC031.5g八【bā】, D-葡萄糖2.5g八【bā】，丙酮酸钠O.llg八)，90%;胎牛血清，10%。
2. 培养条件【jiàn】：气相【xiàng】：空气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱 湿度【dù】为70%-80%。
3.冻存液【yè】：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞：将含【hán】有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加 入4mL培养基混【hún】合均匀。在1000RPM条【tiáo】件【jiàn】下离【lí】心4分钟，弃【qì】去上清【qīng】液，补 加l-2mL培养基后吹匀。然后将所【suǒ】有细胞【bāo】悬液加入培养瓶中培养【yǎng】过夜（或【huò】将【jiāng】 细【xì】胞悬液加入l〇cm皿中，加入约【yuē】8ml培养基【jī】，培养过夜）。第二天【tiān】换液并检 查细胞密【mì】度。
 
细胞传代：
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-22次。
力口【kǒu】 2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于【yú】37°C培
养箱中消化9-22分钟，然后【hòu】在【zài】显微镜下【xià】观察细胞消【xiāo】化情况，若细胞大【dà】部分变圆并脱落，迅速【sù】拿回【huí】操作台，轻敲几下培养瓶【píng】后加少量培养基终【zhōng】止 消【xiāo】化。按6-8ml/瓶补加培【péi】养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离【lí】心【xīn】4分钟，弃去上清【qīng】液，补加l-2mL培养液【yè】后吹匀。将细胞【bāo】悬液【yè】按1: 2到1: 5的【de】比例【lì】分到新【xīn】的含8ml培【péi】养基的新皿中或【huò】者瓶中。
细胞【bāo】冻【dòng】存：待细胞生【shēng】长状态良【liáng】好时，可【kě】进行细胞冻【dòng】存。贴壁细胞【bāo】冻存时【shí】，弃去培养基后加入少量胰【yí】酶，细胞变圆脱落后【hòu】，加入【rù】约lml含血清【qīng】的培养【yǎng】基后加入【rù】冻存管中，再添加1〇%DMSO后【hòu】进行冻存。
 
小鼠黑色素瘤细胞(B16)注意事项：
收到细【xì】胞后，若发现干冰己挥【huī】发干净、冻存管瓶盖【gài】脱落、破损及细胞有【yǒu】污染【rǎn】， 请立即与我【wǒ】们电【diàn】联。
所有动物【wù】细【xì】胞均视为有【yǒu】潜在的生【shēng】物危害性，必【bì】须在二级生物安全台内操作， 并请注【zhù】意【yì】防护，所有废液及【jí】接【jiē】触过此细【xì】胞的器皿【mǐn】需要灭菌后方能丢弃。