小鼠脑微血管内皮细胞（bEnd.3）

小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)
细胞介绍
细胞转染了表达多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆转录病毒载体。
 
细胞特性
1)来源：BALB/c小鼠脑
2)形态：内皮细胞样
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保【bǎo】存：使用含有胎牛血清的2ml冻存管发送【sòng】存活【huó】细【xì】胞。收到细胞后【hòu】，可在【zài】1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操【cāo】作台弃去上清，加入推荐【jiàn】使【shǐ】用的培养基【jī】后【hòu】转移至l〇cm培养【yǎng】皿或者T25培养瓶中【zhōng】培养，传代达到细胞【bāo】生长状态【tài】良好【hǎo】时，再进【jìn】行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备DMEM培养【yǎng】基(DMEM，GIBCO)，90%;胎【tāi】牛血清【qīng】，10%。
2.培养条件：气相【xiàng】：空气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱【xiāng】 湿度【dù】为【wéi】70%-80%。
3.冻【dòng】存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配【pèi】。液【yè】氮储存。
2)细胞处理：
 
复苏细胞：将【jiāng】含有lmL细胞悬液的冻存【cún】管在37°C水【shuǐ】浴中迅速【sù】摇晃解冻，加 入4mL培养【yǎng】基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上【shàng】清液，补加【jiā】l-2mL培养【yǎng】基后吹【chuī】匀【yún】。然后将所有细【xì】胞悬液加【jiā】入培养【yǎng】瓶中培【péi】养过夜（或【huò】将细胞悬液加【jiā】入l〇cm皿中【zhōng】，加【jiā】入【rù】约8ml培养基，培养过夜）。第二天换【huàn】液并检 查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-22次。
力口2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置【zhì】于37°C培养箱中消化【huà】9-22分钟，然后在【zài】显微镜下观察细胞【bāo】消【xiāo】化情况，若细胞大【dà】部【bù】分变圆【yuán】并脱落，迅速拿回操作台，轻【qīng】敲几下培养【yǎng】瓶后加少量培养基【jī】终止消【xiāo】化。
按6-8ml/瓶【píng】补加培养基，轻轻【qīng】打匀后吸出，在【zài】1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养【yǎng】液后吹【chuī】匀。
将【jiāng】细胞【bāo】悬液按1: 2到1: 5的【de】比例【lì】分到新的含8ml培养基的新皿中或者【zhě】瓶中【zhōng】。
细胞冻存【cún】：待细【xì】胞生【shēng】长状态良好【hǎo】时，可进行细胞冻【dòng】存。贴壁细胞冻存【cún】时，弃 去培养基后加入少量【liàng】胰酶，细胞变圆脱【tuō】落后，加入约lml含血清的培【péi】养【yǎng】基后加入冻存【cún】管【guǎn】中【zhōng】，再添加1〇%DMSO后进【jìn】行冻存。
 
小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)注意事项：
收到细胞后，若发现【xiàn】干【gàn】冰己挥【huī】发干净【jìng】、冻存【cún】管瓶盖脱落、破损及细【xì】胞【bāo】有污染，请立即与我们电联。
所有动物细胞均视【shì】为有潜在的生物危害性【xìng】，必须在二【èr】级生【shēng】物安全台内操【cāo】作，并请注意防【fáng】护，所有【yǒu】废液【yè】及接触过此细【xì】胞的器皿需要灭【miè】菌后方能【néng】丢【diū】弃。