小鼠成肌细胞 （C2C12）

小鼠成肌细胞 (C2C12)
细胞介绍
这是【shì】D.Yaffe和0.Saxe丨建立的小鼠成肌【jī】细【xì】胞株的亚【yà】克【kè】隆(由H.Blau等人构建)。 C2C12细【xì】胞株分【fèn】化很快，形成可伸缩【suō】的肌管并特征性的肌蛋白。用骨形成蛋白【bái】2(BMP-2)处理【lǐ】，导致分化途径【jìng】从成肌细胞转换【huàn】成成骨细【xì】胞。检测表明肢骨发育 畸【jī】形【xíng】病【bìng】毒(鼠痘【dòu】)阴性。
 
细胞特性
1)来源：组织：肌肉品系：C3H细胞类型：成肌细胞
2)形态：成肌细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运输和保存【cún】：可【kě】选择干冰【bīng】运输及发送【sòng】复苏存活细【xì】胞方式【shì】：（1)干冰运输，收【shōu】到后立即转【zhuǎn】入液氮冻存或直接复苏；（2)存活细胞，收【shōu】到后应继续生长，传【chuán】代【dài】达到细胞生【shēng】长状态良好时，再进行冻【dòng】存。具体【tǐ】操【cāo】作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠成肌细胞 (C2C12)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 DMEM 培养基【jī】(DMEM，GIBC0)，90%;胎牛【niú】血清，10%。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37摄【shè】氏【shì】度，培养【yǎng】箱 湿【shī】度为70%-80%。
3.冻【dòng】存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配。液氮储存【cún】。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细【xì】胞【bāo】悬液的冻存管在37°C水浴中【zhōng】迅速摇晃解冻，加入4mL培【péi】养基【jī】混合均【jun1】匀【yún】。在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将【jiāng】所【suǒ】有细胞悬【xuán】液加入培养瓶中【zhōng】培养过【guò】夜（或将【jiāng】 细【xì】胞悬【xuán】液加入l〇cm皿中，加【jiā】入约8ml培养【yǎng】基，培养过夜）。第二【èr】天换液【yè】并检 查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-22次。
力口2m丨消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培【péi】养瓶中，置于37°C培【péi】
养箱中消【xiāo】化【huà】9-22分钟【zhōng】，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若【ruò】细胞大部【bù】分变圆并【bìng】脱落，迅【xùn】速拿回操作【zuò】台，轻敲【qiāo】几下培养【yǎng】瓶后加少量【liàng】培【péi】养基终止消化。
按【àn】6-8ml/瓶补【bǔ】加培养【yǎng】基，轻轻打匀后吸出【chū】，在【zài】1000RPM条件下离心【xīn】4分 钟，弃去上清【qīng】液，补加l-2mL培养液后吹匀【yún】。
将细胞悬【xuán】液按1: 2到【dào】1: 5的【de】比例分到新的含8ml培养基的新皿中【zhōng】或者 瓶【píng】中。
细胞【bāo】冻存：待细胞【bāo】生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁【bì】细胞冻存时，弃 去【qù】培养【yǎng】基后加入少【shǎo】量胰【yí】酶，细胞【bāo】变圆脱落后【hòu】，加入约lml含血【xuè】清的【de】培养【yǎng】基后 加入【rù】冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
小鼠成肌细胞 (C2C12)注意事项：
收到细胞后，若发现干冰【bīng】己挥发干【gàn】净、冻【dòng】存【cún】管【guǎn】瓶盖脱落、破损【sǔn】及【jí】细胞有污染，请立即与我们电【diàn】联。
所有【yǒu】动物细胞均【jun1】视为有潜在的生物危害性，必须在二级【jí】生【shēng】物安全【quán】台内操作，并请【qǐng】注意防护，所有废液及【jí】接触【chù】过此细【xì】胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃。