小鼠T淋巴细胞 （CTLL-2）

小鼠T淋巴细胞 (CTLL-2)
细胞介绍
该【gāi】细胞是源【yuán】自C57BL/6的细胞毒性的T淋巴细胞，其生长依赖IL-2。
 
细胞特性
1)来源：T细胞
2)形态：悬浮生长
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保【bǎo】存：使【shǐ】用含有【yǒu】胎牛血清的2ml冻存【cún】管发送存活细胞【bāo】。收到细【xì】胞后，可【kě】在1000RPM，常温【wēn】条件下，离心5min后，于洁净操作【zuò】台弃去上【shàng】清，加入推【tuī】荐 使用的培养基后转移至l〇cm培养皿或者T25培养瓶中培养，传代达到【dào】细胞生长状态良好时，再【zài】进行冻存。具【jù】体操作【zuò】见细胞培养步【bù】骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠T淋巴细胞 (CTLL-2)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基【jī】(RPMI-1640:GIBCO)，80%;补【bǔ】充 2mM的L-谷氨【ān】酰胺，ImM的丙酮酸钠；另【lìng】外添加250U/mlrmlL-2(recombinantmouseInterleukin 2)，添加ConA的T-STIM (BDPharmingen,货号354115)，10%;胎牛血清【qīng】，10%。
2.培养【yǎng】条件：气【qì】相：空气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度【dù】，培养箱 湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用【yòng】现【xiàn】配。液【yè】氮储存。
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将含【hán】有lmL细胞悬液的冻存管【guǎn】在37°C水浴中【zhōng】迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件【jiàn】下离心【xīn】4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将【jiāng】所有细胞【bāo】悬液加【jiā】入【rù】培养瓶中【zhōng】培养过夜（或将【jiāng】 细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培【péi】养基，培养过【guò】夜）。第二【èr】天换液并【bìng】检 查细胞【bāo】密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细【xì】胞，1000RPM，常温【wēn】条件【jiàn】下离心5分钟，弃【qì】去上清【qīng】液，补加l-2mL培养【yǎng】液后吹句，将细胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的比例分到【dào】新的含8ml培 养基的新皿【mǐn】中或者【zhě】瓶中。
方法二：可选择半【bàn】数【shù】换液方式，弃去半数培养【yǎng】基后，将【jiāng】剩【shèng】余细胞悬起，将细 胞悬液按1: 2到1: 3的比【bǐ】例分【fèn】到新的【de】含8ml培养【yǎng】基【jī】的新皿中或【huò】者瓶中。
 
细胞冻存：待细胞生长【zhǎng】状态良好时，可进行细胞冻【dòng】存。悬浮细胞冻存时，应【yīng】 将细胞收集，1000RPM，常【cháng】温条件下离心5分钟【zhōng】，少量保存上清【qīng】液（防止细 胞吸走)，加入部分新【xīn】鲜培养【yǎng】基，吹打均【jun1】匀【yún】后，加【jiā】入到冻存管中，在冻存【cún】管【guǎn】 中加入10%DMSO摇匀后进行冻存。
 
小鼠T淋巴细胞 (CTLL-2)注意事项：
收到【dào】细【xì】胞后【hòu】，若发现干【gàn】冰己挥发干净【jìng】、冻存管瓶盖脱【tuō】落【luò】、破损及细胞有污染，请立即与我们电联。
所有动物细【xì】胞均视为有潜在的【de】生物危害性，必【bì】须在【zài】二级生【shēng】物【wù】安全【quán】台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过【guò】此细胞的器皿【mǐn】需【xū】要灭【miè】菌后方能丢弃。