小鼠单核巨噬细胞（J774A.1）

小鼠单核巨噬细胞(J774A.1)
细胞介绍
该细胞来源于BABL/cN小鼠，有抗【kàng】体依赖的吞噬作用，生长受硫酸葡【pú】聚【jù】糖、PPD和LPS的【de】抑制；可产生【shēng】IL-1(3和【hé】大量【liàng】的溶【róng】菌酶。
 
细胞特性
1)来源：BABL/cN小鼠淋巴
2)形态：单核细胞/巨噬细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运输和保存：可选择【zé】干冰运【yùn】输及发送复苏存活细胞【bāo】方式：（1)干【gàn】冰运输【shū】，收到后立即转入液氮冻【dòng】存或直接复苏；（2)存活【huó】细胞，收到后【hòu】应继续生长【zhǎng】，传代达到细【xì】胞生长状态【tài】良好时，再进行冻存。具体操作见细【xì】胞培【péi】养步骤。
细胞用途：仅供使用。
 
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备DMEM培养基(DMEM，GIBCO);北美胎牛血【xuè】清【qīng】(United States，GIBCO，货号 16000-044)，10%;双【shuāng】抗1%。
2. 培养条件：气相：空【kōng】气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度【dù】，培养箱 湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
1.复苏细胞：将含有【yǒu】lmL细胞【bāo】悬液的冻存管在37°C水【shuǐ】浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀【yún】。在1000RPM条【tiáo】件下【xià】离心4分钟，弃去上【shàng】清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞【bāo】悬液加入【rù】培养瓶中培养过夜（或将 细胞悬液加入【rù】l〇cm皿中【zhōng】，加【jiā】入约8ml培养基【jī】，培养过【guò】夜）。第二天换液【yè】并【bìng】检【jiǎn】 查细【xì】胞密度。
2.细胞传代【dài】：如果细胞密度达【dá】80%-90%，即可进行【háng】传【chuán】代培养。
 
小鼠单核巨噬细胞(J774A.1)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。
力口【kǒu】 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置【zhì】于37°C培
养箱中消化【huà】9-21分【fèn】钟【zhōng】，然后在显微镜【jìng】下【xià】观察细胞【bāo】消化情况，若【ruò】细胞大【dà】部分变圆并脱落，迅速拿【ná】回操【cāo】作台，轻敲几下培养瓶后加少【shǎo】量培养基终止消化。
按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在【zài】1000RPM条【tiáo】件下【xià】离心【xīn】4分钟，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培养液后吹匀【yún】。
将细胞【bāo】悬【xuán】液按1: 2到1: 5的比例分【fèn】到新的含8ml培养基的【de】新皿中或者【zhě】
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞冻存时【shí】，弃去【qù】培养【yǎng】基后，PBS清洗瓶底9-21次【cì】后加入【rù】lml胰【yí】酶，细胞变【biàn】圆脱落后，加入【rù】2ml*培养基终止【zhǐ】消化，可使用血【xuè】球计【jì】数板计数。
1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮【fú】，加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后【hòu】迅速混【hún】匀【yún】，按每【měi】lml的数量分配到冻【dòng】存管中，注意冻【dòng】存管【guǎn】做好标识。本【běn】公司【sī】按每个冻存管细【xì】胞数目大于1X106个细胞冻【dòng】存。
将冻存管置于程序【xù】降温盒【hé】中，放入-80度冰箱，至少2个【gè】小时以后转入液氮【dàn】灌储【chǔ】存。记录冻存管【guǎn】位置以便下【xià】次拿【ná】取。
 
小鼠单核巨噬细胞(J774A.1)注意事项：
收到【dào】细胞后，若发【fā】现【xiàn】干冰己挥发干净【jìng】、冻存管瓶盖脱落、破损【sǔn】及细胞有污染，请【qǐng】立即与我们电【diàn】联。
所有【yǒu】动物细胞均视为有潜在【zài】的生物危【wēi】害性，必须在二级生物【wù】安全台【tái】内操作，并请注意防护，所有【yǒu】废【fèi】液及接触过此细胞的器【qì】皿需要灭菌【jun1】后【hòu】方能【néng】丢弃瓶【píng】中。