小鼠成纤维细胞 （L-929）

小鼠成纤维细胞 (L-929)
细胞介绍
1948年【nián】三月建立了NCTCclone929(小鼠【shǔ】结缔组织)，细胞系L的克隆【lóng】。细胞系L是早建立【lì】的【de】连续培养细【xì】胞系之一，而clone929是早的克隆株。从一只100日龄的雄性C3H/An小鼠【shǔ】的正常皮【pí】下【xià】疏松结缔组织【zhī】入脂肪【fáng】组织【zhī】中建立了亲本细胞系L。第95代【dài】的细胞系L使用毛细管【guǎn】法分离单【dān】细【xì】胞建立了 clone929。检测发【fā】现 鼠痘病毒阴性【xìng】。
 
细胞特性
1)来源：组织：皮下结缔【dì】组【zǔ】织；疏松结缔组织及脂肪【fáng】品【pǐn】系：C3H/An
2)形态：成纤维细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运输和保存：可选择干冰运【yùn】输【shū】及发送复苏【sū】存活细胞【bāo】方式：（1)干冰运输，收到后立即【jí】转入液【yè】氮冻存或直【zhí】接复苏；（2)存活细胞【bāo】，收到后应继续生【shēng】长，传代达【dá】到细胞生长【zhǎng】状【zhuàng】态良【liáng】好时【shí】，再进行冻存。具体操作见【jiàn】细【xì】胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠成纤维细胞 (L-929)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备【bèi】MEM培养【yǎng】基(MEM:GIBC0)，90%;马血清(GIBC0,货 号 16050-122)，10%。
2.培养条【tiáo】件：气相：空气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37摄【shè】氏度【dù】，培养箱 湿度为【wéi】70%-80%。
3. 冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现【xiàn】配【pèi】。液【yè】氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存【cún】管在37°C水浴中迅速摇晃【huǎng】解冻，加【jiā】入4mL培养基混【hún】合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后【hòu】吹匀。然后将所有细胞悬液【yè】加【jiā】入培养瓶中【zhōng】培养过夜（或【huò】将【jiāng】细胞悬【xuán】液加入l〇cm皿【mǐn】中，加入约8ml培养基【jī】，培养过夜【yè】）。第二天换【huàn】液并检【jiǎn】 查细【xì】胞【bāo】密【mì】度【dù】。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。
力口2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶【píng】中，置于【yú】37°C培养箱中消化9-21分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细【xì】胞【bāo】大部【bù】分变圆并脱【tuō】落【luò】，迅【xùn】速拿回操作台，轻敲几【jǐ】下【xià】培养瓶后加少【shǎo】量培养基终【zhōng】止消化。
按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心【xīn】4分【fèn】钟【zhōng】，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培养【yǎng】液后吹匀。
将细胞【bāo】悬液按1: 2到1: 5的【de】比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者【zhě】瓶【píng】中。
 
细胞冻【dòng】存：待细胞生长状态良好时【shí】，可进行细胞冻存。贴壁细胞【bāo】冻存时，弃去培养【yǎng】基后加入少量【liàng】胰【yí】酶【méi】，细胞变圆【yuán】脱落后，加入约lml含血【xuè】清的培养【yǎng】基后加入冻【dòng】存管中，再添加1〇%DMSO后进【jìn】行冻存。
 
小鼠成纤维细胞 (L-929)注意事项：
收到细胞后，若发现干冰【bīng】己挥发干【gàn】净、冻存管瓶盖【gài】脱落、破损【sǔn】及细【xì】胞有污染，请立即与我们电联。
所【suǒ】有动物细胞均【jun1】视为有潜在【zài】的生物危【wēi】害性，必须在二级生物安全台内操作【zuò】，并请注意防护，所有废液及接【jiē】触过【guò】此细【xì】胞【bāo】的器皿需要灭菌【jun1】后方能【néng】丢弃。