小鼠膀胱癌细胞 （MB49）

小鼠膀胱癌细胞 (MB49)
细胞特性
1)来源：小鼠膀胱癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和【hé】保存：使用含有胎【tāi】牛血清的2ml冻存管发【fā】送存活细胞。收到【dào】细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操【cāo】作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至【zhì】l〇cm培养皿或者【zhě】T25培养【yǎng】瓶【píng】中培养，传代达【dá】到细胞【bāo】生长状态良好时【shí】，再【zài】进行冻存。具体操作见【jiàn】细胞【bāo】培养步骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠膀胱癌细胞 (MB49)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO)，90%;胎牛【niú】
血清，10%。
2.培养条【tiáo】件：气【qì】相：空气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度，培养箱湿【shī】度为【wéi】70%-80%。
3.冻存【cún】液：90%*培【péi】养基，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有lmL细胞悬液的【de】冻存【cún】管在37°C水浴中迅【xùn】速摇晃解冻，加入4mL培养【yǎng】基混合均匀。在1000RPM条件【jiàn】下离心4分【fèn】钟，弃去上清液，补 加l-2mL培养基【jī】后吹匀。然【rán】后【hòu】将【jiāng】所【suǒ】有细【xì】胞悬液加入培养【yǎng】瓶中培养过【guò】夜（或将细胞悬液加入【rù】l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过【guò】夜）。第二天换液【yè】并检 查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。
力口2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培【péi】养箱中消化9-21分钟，然后在显微镜下观察细胞【bāo】消化【huà】情况，若细【xì】胞大部【bù】分【fèn】变圆并【bìng】脱【tuō】落【luò】，迅【xùn】速拿【ná】回操作台，轻敲【qiāo】几下培养瓶后加少【shǎo】量培养基【jī】终止消化。
按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下【xià】离【lí】心4分钟，弃【qì】去上清【qīng】液，补【bǔ】加l-2mL培养液【yè】后【hòu】吹匀。
将【jiāng】细胞悬【xuán】液按1: 2到【dào】1: 5的比【bǐ】例分到新的含8ml培【péi】养基的新皿中或者 瓶【píng】中。
 
细【xì】胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞【bāo】冻存【cún】。贴【tiē】壁细【xì】胞冻存时，弃【qì】去培【péi】养基后加入少量胰酶，细胞变【biàn】圆脱落后，加入约lml含血【xuè】清【qīng】的培养基后加【jiā】入冻存【cún】管【guǎn】中，再添【tiān】加1〇%DMSO后进【jìn】行冻存。
 
小鼠膀胱癌细胞 (MB49)注意事项：
收【shōu】到【dào】细胞后，若发【fā】现干冰己挥发【fā】干【gàn】净、冻存管瓶盖脱落【luò】、破损及细胞有污染，请立即与我们电【diàn】联。
所有【yǒu】动物细胞均【jun1】视为有潜在的生【shēng】物危【wēi】害性，必须在二级生物安【ān】全台内操作，并请注意防护，所有废液【yè】及【jí】接【jiē】触过【guò】此细胞的【de】器皿需要【yào】灭菌后方能【néng】丢弃。